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EAAL方法预防肝癌复发转移的研究发表者：毛一雷(访问人次：547) 研究摘要：肝癌手术后复发转移的控制，是肝癌治疗面临的最主要挑战。细胞免疫治疗方法EAAL在大规模随机临床试验中被证明可以降低肝癌术后复发率18%，使复发的危险率减少41％。在本研究中，我们将采用不同的治疗方案，对EAAL配合手术、介入化疗和局部栓塞等常规肝癌治疗方法对复发和转移及病人生存期的影响进行系统的临床研究。在此基础上，我们将进一步研究EAAL方法作用的可能机制，及肝癌特异性淋巴细胞的治疗可行性。北京协和医院肝脏外科毛一雷名词缩写：EAAL: expanded activated autologous lymphocytes, 扩增活化的自体淋巴细胞CIK Cells: cytokine induced killer cells, 细胞因子诱导的杀伤细胞TIL: tumor infiltrating lymphocytes, 肿瘤浸润淋巴细胞研究目的：1. 在大规模随机临床试验的基础上，试验EAAL方法作为免疫辅助治疗，对手术和其它常规治疗后病人复发和转移的抑制作用；2. 通过设计不同的EAAL使用疗程和使用频率，试验该方法延长病人生存期的效果；3. 在上述基础上，研究EAAL方法可能的作用机制；4. 通过引入肿瘤特异性淋巴细胞的方法，研究更有效的肝癌细胞免疫治疗方法。研究背景：大多数肝细胞肝癌，特别是伴发肝硬化和其它一些症状的情况下，预后往往都很差。外科手术，包括肿瘤切除术或是肝移植，往往是肝癌治疗的唯一手段。化疗和肿瘤栓塞术只能缓解症状，对存活率和存活时间没有显著改善[1]。因此，寻找肝癌手术后预防转移和复发的手段，成为肝癌治疗的重要研究方向。尽管大多数肝癌病人的预后不好，但越来越多的证据表明，免疫应答至少在部分肝癌病人中，对疾病的进展乃至病人的存活至关重要。1. T淋巴细胞:（1） CD8+ T细胞对肝癌细胞具有特异性识别杀伤作用：较早的研究表明，与大量无T淋巴细胞的样本相比，有T淋巴细胞浸润的小肝癌的复发率低、5年生存率高。而且占优势的浸润淋巴细胞为CD8+的T淋巴细胞，而非CD4+的T淋巴细胞[2]。随后，在肝癌组织中发现了特异性识别多种肿瘤相关抗原[3]、肿瘤特异性共享抗原[4]、自体抗原（AFP[5]和SART-1[6]）、病毒表位[7，8]的T细胞。CD8+ T细胞的浸润与肝癌细胞的凋亡呈正相关[Eur J Surg Oncol. 2004 Feb;30(1):53-7. CD8+ lymphocyte infiltration and apoptosis in hepatocellular carcinoma.Ikeguchi M, Oi K, Hirooka Y, Kaibara N.]我们自己的工作证明，肝癌组织浸润的CD8+ T细胞，在体外经过活化后，具有杀伤自身肝癌细胞的功能（未发表数据）。（2） CD8+ T细胞可特异性识别杀伤具有干细胞特征的肿瘤细胞肿瘤干细胞被发现普遍存在于包括肝癌[ ]在内的多种恶性肿瘤组织中，并被认为是肿瘤常规治疗后复发和转移的直接原因[Cancer Cell Int. 2007; 7: 9. Role of stem cells in cancer therapy and cancer stem cells: a review Jayesh Sagar,Boussad Chaib, Kevin Sales, Marc Winslet, and Alexander Seifalian]。而另一方面，肿瘤干细胞同样表达肿瘤特异性抗原，并可作为免疫治疗的靶点，如前列腺癌细胞表达的前列腺干细胞抗原PSCA[ ]。最新的研究表明，多发性骨髓瘤（MM）的癌前病变MGUS常常表达胚胎干细胞参与自我更新的关键分子SOX2。而识别该分子特异性T细胞的存在提示癌前病变的良好预后。我们最近建立的一株干细胞样肝癌细胞系中，发现该株细胞表达大量肿瘤特异性共享抗原，同时可被来源于同一病人自身的CD8+ T细胞特异性杀伤。这提示我们通过利用免疫治疗杀伤肿瘤干细胞，可能达到控制肿瘤复发和转移的目的。（3）辅助性CD4+ T细胞对移植后肝癌的复发有抑制作用有文献表明，肝癌患者进行肝移植后，肝癌复发的危险率与CD4：CD8的比例呈正相关，但此种CD4+ T细胞为辅助性T细胞，而不是表达CD25分子的调节性T细胞（regulatory T cells）[9]。（4） CD4+CD25+调节性T细胞可通过抑制CD8+ T细胞的作用促进肝癌细胞生长存在于肿瘤边缘位置及肿瘤浸润性调节性CD4+CD25+T细胞具有抑制肿瘤特异性CD8+ T细胞增殖和活化的作用，成为肝癌细胞不受控制生长的原因之一[9，Hepatology. 2005 Apr;4