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Fas抗原表达与慢性乙型肝炎关系的评价 2009-12-13 邵凤珍　赵桂鸣　高蓬　陈文治　张迈仑 　　本研究应用免疫组化方法检测一组慢性乙型肝炎肝组织中Fas抗原表达状况并评价其与乙型肝炎病毒(HBV)感染及肝损害程度的关系。 材料与方法 　　一、研究对象 　　45例慢性乙型肝炎患者均为本院1996年住院患者。病程均在6月以上，乙肝病毒标志物(HBsAg、HBeAg、HBV DNA)阳性，肝功能异常。每例均做肝穿刺活检。经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋后制成5μm连续切片，常规HE染色做病理诊断。按国际“94方案”Scheuer病理分类(G/S)法［1］(G代表炎症活动度分级；S代表纤维化程度分期)。免疫组化检测肝组织中病毒标志(HBcAg)及细胞凋亡因子(Fas抗原)。 　　二、方法 　　(一) HE染色病理诊断　按Scheuer分类法，由天津市心血管病研究所协助检测。 　　(二) HBcAg免疫组化　药盒购自美国Zymed公司。天津市心血管病研究所协助检测。 　　(三) 兔抗-Fas(N18)多克隆抗体应用免疫组化S-P法，药盒购自美国Zymed Lad公司。以已知阳性片作对照，根据染色强度及分布将Fas阳性程度分为+～。+仅少数阳性细胞，较多阳性细胞，多分布于汇管区小叶内，碎屑状坏死区；阳性细胞呈弥散分布于汇管区小叶内及周边碎屑状坏死区。北京佑安医院病理科协助检测。 　　(四) 血清HBV DNA检测　采用PCR方法，药盒购自美国Biotrronics, Corporation公司。本院科研室做定性检测。HBsAg、HBeAg应用ELISA方法测吸光度比值(P/N)，药盒购自北京生物制品研究所，本院科研室检测。 结　　果 　　各类慢性乙型肝炎肝组织中Fas抗原表达，主要位于肝细胞胞浆，少部分在胆管上皮细胞浆内表达。阳性细胞分布于汇管区小叶内，大多数阳性细胞位于汇管区小叶内及周边碎屑状坏死区，呈弥散分布。少数阳性细胞临近碎屑状坏死区胆管上皮也呈阳性反应。 　　一、Fas抗原表达和HBV感染的关系 　　在可检出HBcAg阳性组中，Fas抗原检出阳性率明显高于HBcAg阴性组，经统计学处理前者明显高于后者，P0.01(见表1)。 　　二、Fas抗原阳性与肝损害的关系 　　病理诊断按Scheuer慢性肝炎分类(表2)。本组45例各类慢性乙型肝炎肝组织中Fas抗原的检出率与肝 表1　肝组织中Fas抗原表达与 病毒标志物的关系 项 目 Fas+(%) Fas- 总计 HBcAg(+) 23(76.7) 7 30 HBcAg(-) 5(33.3) 10 15 总计 28 17 45 　　χ2=7.99　P0.01 损害程度比较(见表3)，肝损害程度重者Fas检出率高于肝损害轻者，Fas抗原阳性率占百分比依次为G4G3G2G1;S4S3S1S2。提示Fas抗原表达与肝损害的关系密切。 表2 Scheuer 慢性肝炎病理分类 炎症活动度分级 纤维化程度 分级 汇管区周围 小叶内 分期 纤维程度 G0 无或轻度炎症 无炎症 S0 无 　 　 　 S1 无或汇管区扩大纤维化 G1 汇管区炎症（CPH） 炎症但无坏死 S2 汇管区周围纤维化或纤维间隔形成结构 G2 轻度碎屑状坏死 点灶状坏死或嗜酸小体 　 　 　 　 S3 纤维代伴小叶结构紊乱 G3 中度碎屑状坏死 重度灶状坏死 　 （distortion）无肝硬化 　 （中型CAH） 损伤包括桥接坏死 S4 可能的或肯定的肝硬化 G4 重度碎屑状坏死 （重型CAH） 多小叶坏死 　 　 讨　　论 　　许多研究发现，在肝病的病理切片上常可见到凋亡的肝细胞，提示在肝病发病时，肝细胞坏死和肝细胞凋亡同时存在。且Fas系统是介导凋亡的重要途径［2］，本研究对45例慢性乙型肝炎患者肝组织中检测Fas抗原表达状况，阳性率为62%，较文献报道［3］稍低，可能主要与本组病例大多数肝组织病变较轻有关，本组慢性乙型肝炎Fas抗原检出率随着炎症活 表3　肝组织中Fas抗原表达与肝损害的关系 炎症活动度(G) n Fas抗原+(%) 纤维化程度(s) n Fas抗原+(%) + ++ +++ 小计 + ++ +++ 小计 G1 12 3(25) 1(8) 1(8) 5(41) S1 17 4(23) 3(18) 2(12) 9(53) G2 20 1(5) 6(30) 4(20) 11(55) S2 13 2(15) 3(23) 1(8) 6(46) G3 11 4(37) 3(27) 3(27) 10(91) S3 11 1(9) 4(36) 4(36) 9(81) G4 2 0 1(50) 1(50) 2(10