低浓度异氟醚暴露对新生SD幼鼠海马齿状回神经发生影响的研究.docVIP

麻醉学基础研究 低浓度异氟醚暴露对新生SD幼鼠海马齿状回神经发生影响的研究 中山大学附属第二医院麻醉科 510120 张静 王寿平 彭书崚 目的：追踪观察低浓度异氟醚暴露下新生SD幼鼠海马齿状回神经前体细胞增殖，存活，分化及迁移等的变化，从而探讨低浓度异氟醚暴露对发育高峰期海马齿状回神经发生的影响。 方法：制作幼鼠吸入麻醉模型，用腹腔注射5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)标记技术结合免疫组化方法行神经发生的研究。将72只出生5天的SD幼鼠采用完全随机设计分为3组: ①实验组Ⅰ（n=28）：连续3天，每天吸入0. 5%异氟醚3h，异氟醚吸入完毕后0day，3day，7day，10day，14day行单次Brdu腹腔注射（100mg/kg）标记各时间点增殖神经元，24h后用免疫组织化学法检测Brdu阳性的新增殖神经元；②实验组Ⅱ（n=8）：连续三天，每天吸入0. 5%异氟醚3h，异氟醚吸入完毕后3day行单次Brdu腹腔注射（100mg/kg）标记，2周后用BrdU/ 神经元核性蛋白(NeuN) 、BrdU/ 胶质纤维酸性蛋白( GFAP)双标免疫组织化学方法分别标记成熟颗粒细胞和胶质细胞，观察幼鼠齿状回增殖神经元的存活，分化，迁移及定位；③正常对照组(Con组，n=36)，和各实验组等数量配对，除不吸入异氟醚外余处理与实验组相同。采用Image Pro Plus 6.0软件行图像采集及分析，SPSS11.5统计软件行数据整理及统计分析。 结果：BrdU标记后24h，BrdU免疫阳性细胞主要分布于齿状回下区，成簇出现，细胞核形状不规则。异氟醚暴露完毕后0day，3day，7day三个时间点，实验组海马齿状回BrdU免疫阳性细胞数目均较相应时间点对照组增加，增加的趋势表现为先上升后减弱，与对照组相比，0day时实验组Brdu+细胞数目约增加25.4%（Con 1375±390 vs Iso 1724±334，P=0.028）Iso 1056±392,P=0.001）Iso 462±132,P=0.012）Iso 250±95,P=0.94）BrdU阳性细胞存活率为64.4%，对照组存活率为65.3%（P0.05）。实验组和对照组幼鼠分别约76.2％和79.3％的BrdU阳性细胞同时表达NeuN (P0.05)，两组幼鼠分别约3.5%和2.9%的BrdU阳性细胞同时表达GFAP(P0.05)。 结论及讨论：本研究结果表明SD幼鼠在神经发生的高峰期（出生5-7天）反复接受0.5%的异氟醚暴露可增加SD幼鼠海马齿状回Brdu阳性细胞的数目，这种促增殖的效应约能维持7天左右。虽然随标记时间延长,存活细胞数量逐渐减少，但2周后实验鼠BrdU阳性细胞数目仍高于相应对照组。实验组大部分新生细胞能长期存活，并且和对照组的新生细胞一样大部分均分化为神经元，能正常迁移并植入颗粒细胞层。这些研究结果提示低浓度异氟醚暴露可促进发育高峰期海马齿状回神经发生，新生的细胞可能会对海马功能产生影响，但是否会导致幼鼠短期或长期学习记忆功能的改变尚需进一步的行为学实验证实。 关键词：异氟醚，海马，齿状回，神经发生，新生鼠