沈阳农业大学免疫学第三章抗体.pptVIP

一、多克隆抗体 由不同的B细胞克隆产生的针对抗原中多种抗原决定簇的多种抗体的混合物叫多克隆抗体。 二、单克隆抗体 由单一克隆B细胞产生的，只识别抗原分子某一特定抗原决定簇的具有高度特异性的抗体。 针对多种抗原决定簇 多种抗体的混合物 针对一种抗原决定簇 一种抗体 蛋白质抗原分子 1、2、3、4、5表示抗原决定簇 免疫血清 如何制备单克隆抗体呢？ 分离多克隆抗体 只用一种抗原决定簇免疫机体 选出单一的一个B细胞克隆来分泌抗体 1975年，Kohler和Milstein首创单克隆抗体技术 或称为小鼠B细胞杂交瘤技术来生产单克隆抗体 B细胞 不能在体外长期存活 能分泌抗体 骨髓瘤细胞 能在体外长期存活 不能分泌抗体 杂交瘤细胞 既能在体外长期存活 又能分泌抗体 单克隆抗体制备原理 筛选杂交瘤制备单克隆抗体 1、免疫动物：得B细胞 6、单克隆抗体的大量生产 或冻存杂交瘤细胞 2、细胞融合：使B细胞与骨髓瘤细胞融合 聚乙二醇 3、选择杂交瘤细胞：得纯杂交瘤细胞 H：次黄嘌呤 A：氨基蝶呤 T：胸腺嘧啶核苷 HGPRT- 4、杂交瘤细胞的克隆化：得单个杂交瘤细胞 稀释法 HAT培养基 单克隆抗体制备过程 5、用目标抗原决定簇筛选产生特异性抗体的杂交瘤细胞 体外培养或小鼠腹腔培养后收集腹水 三、基因工程抗体 （一）嵌合抗体 （二）人源化抗体 只有互补决定区（CDR）是鼠源的 其余部位都是人源的 V区是鼠源的 C区是人源的 用分子生物学技术按人类设计重新组装的新型抗体分子， 可保留或增加天然抗体的特异性和主要生物学活性， 去除或减少无关结构，从而克服单克隆抗体在临床应用方面的缺陷。 减少鼠源性单克隆抗体的免疫原性 保留抗体特异性 鼠源性抗体 FcγR 促进吞噬细胞的吞噬能力 IgG Antibody-Dependent Cell-mediated Cytotoxicity FcγR * 第一节 免疫球蛋白的结构和类别 一、抗体的基本结构 二、免疫球蛋白的类别 三、Ig的类别转换 第三节 抗体的功能 一、V区的功能 二、C区的功能 第四节　单克隆抗体和基因工程抗体 一、多克隆抗体 二、单克隆抗体 三、基因工程抗体 第二节 抗体多样性的原理 一、免疫球蛋白的基因结构 二、免疫球蛋白基因的重排 三、免疫球蛋白的多样性 抗体（antibody，Ab）：机体免疫细胞被抗原激活后，由分化成熟的终末B细胞----浆细胞合成并分泌的一类能与相应抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 具有抗体活性或化学结构与抗体分子相似的球蛋白统称为免疫球蛋白（ immunoglobulin，Ig ） γ-球蛋白或丙种球蛋白 不准确 膜抗体或叫BCR（B细胞抗原受体） 1、抗原刺激后产生 2、浆细胞合成分泌 3、具有免疫功能 4、化学本质是球蛋白 与抗原结合，即抗体活性 一、抗体的基本结构 1、免疫球蛋白的基本结构 （以IgG为例） （1）4条肽链：2条相同的重链（H链，Heavy）和2条相同的轻链（L链，Light）。“Y”字型对称。 （2）每条多肽链都可分为可变区（V区,Variable）和恒定区（C 区,Constant） （3）可变区包括超变区（ Hypervariable Region, HVR ）和骨架区（ Framework Region, FR ）。 （4）铰链区（hinge region） CH1 VL CL VH CH2 CH3 Hinge Region Carbohydrate Disulfide bond N 端 C端 互补决定区（CDR） Complementarity-determining Region 2、免疫球蛋白的酶解片段 (IgG) 3个： 2个相同的 Fab 段+ 1个是Fc 段 （2）胃蛋白酶水解片段 F（ab）2+pFc （1）木瓜蛋白酶水解片段 抗原结合片段(Fab) Fragment antigen binding 3、免疫球蛋白的功能区 每条多肽链可折叠成几个球形区域，它们具有不同的生物学功能，称免疫球蛋白的功能区，每个区域约有110个氨基酸。 L链:VL区、CL区 H链： IgG、IgA、IgD: VH区、CH1区、CH2区、CH3区 IgM、IgE： VH区、CH1区、CH2区、CH3区、 CH4区 （1）VL和VH：抗原结合的部位 （4）CH3（IgG）：与多种免疫细胞的Fc受体结合 （5）CH4（IgE）：与多种免疫细胞的Fc受体结合 各功能区的功能 （2）CL和CH1：提高抗体与抗原的结合能力 FcγR FcεR （3）CH2（IgG）和CH3（IgM）：补体结合部位 二、免疫球蛋白的类别 H链C区的不同： γ: Gammar