211工程安徽大学细菌基因重组及遗传分析.ppt

中断杂交实验作图 （1）不同的非选择标记进入受体且重组的时间不同，但都是稳定的； （2）各基因的重组频率随着时间的增加而增加，直至极值； （3）按时间顺序，先重组和后重组的基因，重组率的极值在逐步减少； 该方法主要根据基因转移的先后次序，以时间为单位，求基因间的遗传距离。 性导（sexduction） Hfr 菌上的F因子从染色体上不精确解离，带有了染色体的基因，这种带有了染色体的基因的F因子称为F’（F-prime）. F’上的基因与细菌染色体的基因形成了部分二倍体。 利用F因子形成部分二倍体的过程，称为性导。 雅科和阿代尔伯格发现：　　特殊的Hfr菌株能把lac+ 等位基因高频率地转移到F lac-受体中。①．lac基因位于远端，中断杂交实验中只有1/1000重组率；②．由F　携带lac+ 基因进入受体后可在lac位点上形成部分二倍体F　lac+ / lac-。 四、中断杂交试验和基因定位 中断杂交：就是将两个菌株（例如Hfr a+ strs×F- a- strr）在培养液中进行通风培养，每隔一定时间取样，把菌液放入组织捣碎器里搅拌以中断杂交，经过稀释接种到鉴别培养基上，待形成菌落后鉴定它们的基因型。 1957年Wollman和Jacob首次进行中断杂交实验： 供体菌：HfrH strs thr+ leu+ azis tons lac+ gal+ 受体菌： F- strr thr? leu- azir tonr lac- gal- 将大约10倍的F-菌与 Hfr对数期菌混合，轻轻振荡培养 在不同时间间隔取样，然后在组织搅拌中剧烈振荡 振荡后的培养物涂布于加了链霉素的基本培养基上 筛选不同于两个亲本的thr+ leu+ strr重组子 再对每一个重组子的非选择性标记azi ton lac gal 进行测定。 azi：叠氮化钠抗性， ton：噬菌体T1抗性 1分钟≈20%的重组值 性导（sexduction）: 　　性导：指接合时由F　因子所携带的外源DNA整合到细菌染色体的过程。 　　F 因子整合过程： 　　可逆：发生环出时，F因子又可重新离开染色体 　F’因子使细菌带有某些突出的特点： ⑴．F　因子转移基因频率极高，如同F+因子转移频率； ⑵．F　因子自然整合率极高，并且整合在一定的座位上。 性导在大肠杆菌遗传研究中的作用： ①．分离出大量F因子（每个F　因子携带有不同大肠杆菌基因） 利用不同基因在一起的并发性导的频率来作图； ②．通过性导产生部分二倍体确定等位基因位置、显隐性关系； ③. 性导形成的部分二倍体可用作互补测验 确定两个突变类型是否属于同一个基因。 五、BAC人工染色体 为什么会想到把F质粒改造成载体？ 自然发生的F因子能携带1/4的大肠杆菌染色体而不显张力或不稳定。 拷贝数低: 1 有助于减少DNA 分子间重组 保证文库转化子生长平衡 减小对受体菌的毒副作用 Bacterial Artificial Chromosome 1992年Shizuya等以F质粒为基础构建的具有大容量克隆能力的载体--- BAC 。 2.基因中断 3.插入基因 第二节 接合作用（conjugation） 接合作用：是指细菌通过细胞间的接触而导致遗传物质的转移和基因重组的过程，又称细菌杂交。介导接合作用的质粒叫做接合质粒（conjugative plasmid），也叫自主转移质粒（self-transmissible plasmid）或性质粒（sex plasmid）。 接合作用的特征： 接合作用中需要供体和受体细胞间的直接接触---G-通过性质粒编码的性菌毛介导，G+由受体细胞分泌类似于性激素的短肽刺激细胞接合； G-细菌中的接合质粒一般分子量较大，有几十个tra基因参与转移， G+细菌中的接合质粒较小，只有几个tra基因参与转移； 无论G-或G+菌，接合质粒除自身能从供体向受体转移外，还能带动供体染色体向受体转移。 一、接合现象的发现与证实 Lederberg和Tatum（ 1946年）建立了用大肠杆菌K12的两个营养缺陷型菌株在基本培养基上是否生长，来检验细菌杂交或重组存在的方法。在此以前，没有人证实细菌杂交现象。细菌杂交有别于典型的有性杂交，故称为细菌接合作用。 A菌株 B菌株 混合培养后在基本培养基中出现的原养型菌落是否是杂交的结果？ 必须要排除下列几种解释： 一是细菌细胞并没有接合，而是交换了DNA(转化作用) 二是细胞并未接合，而是通过培养基交换了养料(互养) 三是细菌细胞并未接合而是亲本发生了回复突变 当时Lederberg和Tatum已经证明，当把A菌株的培养液经过灭菌，再加入到B菌株的培养液中，没有原养型菌落，这