lecture06b蛋白质纯化.pptVIP

蛋白质纯化的重要作用 层析原理与分类 概念：分离体积 概念：分离峰 概念：分辨率取决于选择性和柱效 概念：选择性 概念：柱效 概念：峰展宽的影响因素 概念：涡流扩散 概念：流动相流速对峰宽的影响 概念：柱效测定方法 概念：峰的形状（对称性） 概念：流动相线性流速 概念：吸附层析的载量 凝胶过滤 凝胶过滤：填料结构 凝胶过滤：原理（空间排阻） 凝胶过滤：体积排阻程度决定洗脱位置 凝胶过滤：分离体积 凝胶过滤：分离体积 凝胶过滤：分配系数 Kd 凝胶过滤：分配系数 Kav 凝胶过滤：分配系数 Kav 凝胶过滤：分配系数 Kav 凝胶过滤：选择性曲线 凝胶过滤：排阻极限 凝胶过滤：分级范围 亲和层析 亲和层析 亲和层析：主要阶段 亲和层析：主要阶段 亲和层析：配集与目标蛋白的特异性 亲和层析：族特异性配基 亲和层析：洗脱方案 亲和层析：标签蛋白纯化 His 标签蛋白的纯化 GST 标签蛋白的纯化 MBP 标签蛋白的纯化 Strep （II）标签蛋白的纯化 亲和层析：标签蛋白 亲和层析：标签蛋白 亲和层析：纯化标签蛋白 亲和层析：纯化组氨酸标签蛋白 亲和层析：组氨酸标签蛋白的优点 亲和层析：组氨酸标签蛋白的优点 亲和层析：金属离子与组氨酸标签的亲和力 亲和层析：组氨酸标签蛋白洗脱模式 亲和层析：蛋白 A 亲和层析：蛋白 G 亲和层析：蛋白 A 和 G 的结合特异性 亲和层析：纯化人抗体 离子交换层析 离子交换层析 离子交换层析：机理 离子交换层析：pH 对电荷的影响 离子交换层析：滴定曲线 离子交换层析：离子交换剂类型 离子交换层析：基本步骤 离子交换层析：功能团性质 离子交换层析：基架的多孔性、粒径与稳定性 离子交换层析：线性与步级洗脱 疏水相互作用 疏水相互作用：长处与短处 长处 温和 稳定 选择性成度高 与其它层析分离技术互补 短处 可预测性较低 高盐 粘度 蛋白质沉淀甚至变性 疏水相互作用：原理 疏水相互作用：主要阶段 蛋白质纯化策略 蛋白质纯化策略 蛋白质纯化策略 蛋白质纯化策略 蛋白质纯化策略 蛋白质纯化策略 蛋白质纯化策略 蛋白质纯化策略 蛋白质纯化策略 蛋白质纯化策略 蛋白质纯化策略 蛋白质纯化策略 蛋白质纯化策略 蛋白质纯化策略 蛋白质纯化策略 蛋白质纯化策略 * 概念：决定吸附层析载量的因素 概念：决定吸附层析载量的因素 概念：吸附层析动态载量 *