玉米浸泡水中提取提纯脂多糖的方法.doc

玉米浸泡水中提取 提纯脂多糖的方法一种玉米浸泡水中提取、提纯脂多糖的方法，其特征是本方法通过分别采用超滤法、等电点法、三氯乙酸法三种方法分离玉米浸泡水中的蛋白质，再用纳滤膜将浸泡水浓缩，并通过乙醇沉淀法进一步分离浸泡水中的蛋白质，最后，用活性炭将脂多糖从浸泡水中提取出来：　 　（１）等电点法分离蛋白及普通多糖：　用饱和氢氧化钠溶液调节浸泡水中的pＨ值到７．３，将浸泡液通过分离机分离，在每分钟３０００转转速下离心２５分钟，分离沉淀上清液；　 　（２）超滤法分离蛋白及普通多糖：选用截留分子量１０万的超滤膜，对上述上清液进行超滤，取过滤液； （３）三氯乙酸法分离蛋白及普通多糖：　在上述滤液中加入占其体积０．５％的三氯乙酸，搅拌３０分钟，于每分钟３０００转条件下离心２５分钟，分离出含蛋白及普通多糖的上清液；　 （４）浓缩：　采用纳米过滤装置，将分离蛋白及普通多糖后的浸泡水浓缩６－１０倍，经纳滤膜过滤，取浓缩后的浸泡水；　 （５）再分离：　在上述浓缩浸泡水中加入浓度为９５％的乙醇，使浸泡水中乙醇浓度达到３０％，搅拌５分钟，于每分钟２６００转下离心３０分钟，分离后取上清液；　 （６）提取：将上述上清液ＰＨ值调整为６．５０，加入占其重量１．５－２．５％的经处理的活性炭，搅拌１５分钟，静置１０分钟，最后过滤，分离取出吸附了脂多糖活性炭；　 （７）提纯：　将吸附了脂多糖的活性炭装填于１．６×９０厘米的色谱柱中，用１０毫摩尔每升三羟甲基氨基甲烷－盐酸／１０毫摩尔每升氯化钠进行洗脱，洗脱液流速为每小时８毫升，分步收集洗脱液，每管收集４毫升，共收集５２管，将第２７～３６管洗脱液合并，冷冻干燥；　　将ＤＥＡＥ－葡聚糖凝胶Ａ－５０装填于１．６×４０厘米的色谱柱中。取上述干燥产物０．２５克，溶于６毫升的１０毫摩尔每升三羟甲基氨基甲烷－盐酸／１０毫摩尔每升氯化钠中，将其加入色谱柱。用浓度依次增加的三羟甲基氨基甲烷－盐酸／氯化钠溶液进行洗脱，同时进行分步收集。每管收集６毫升，共收集６０根管，洗脱剂流速为每小时８毫升； （８）脱盐：将第３４～５２根管的洗脱液合并，用葡聚糖凝胶Ｇ－１５层析柱进行脱盐，以超纯水洗脱，最后冻干得到脂多糖成品。玉米皮活性多糖与其制备方法本发明涉及到玉米非淀粉组分——玉米皮综合利用提取活性多糖的一种方法，属于农副产品精深加工及其副产物综合利用的技术领域。本发明公开了一种玉米皮活性多糖组分与其制备方法，以玉米皮为原料，经微波预处理、超声波提取、除蛋白、脱色、Ｓｅｐｈａｄｅｘ?Ｇ－７５柱层析、浓缩等工艺过程，可制备出玉米皮多糖类化合物提取率高达到８．１６％、蛋白质脱除率达到８０．４２％、糖保留率为８９．９３％、对Ｓ１８０细胞的抑制率达到５９．１２％，是０．０５ｍｇ／ｍｌ环磷酰胺的增值抑制率的１．４３１倍的玉米皮活性多糖组分。因此，本发明所开发具有抗肿瘤活性的多糖类功能因子组分，不仅可大大提高玉米非淀粉组分研究与开发的技术水平和玉米加工企业的经济效益，同时也可为玉米皮活性多糖产品开发与产业转化提供一条有效途径项目名称：玉米皮活性多糖与其制备方法 应用领域：本发明涉及到玉米非淀粉组分——玉米皮综合利用提取活性多糖的一种方法，属于农副产品精深加工及其副产物综合利用的技术领域。 项目水平： 专利号：ZL 2010 1 0508829.4 授权公告日：2012年06月27日 技术指标：本发明专利技术可以制备出玉米皮多糖类化合物提取率高达到8.16%、蛋白质脱除率达到80.42%、糖保留率为89.93%、对S180细胞的抑制率达到59.12%，是0.05mg/ml环磷酰胺的增值抑制率的1.431倍的玉米皮活性多糖组分。 创新内容：本发明公开了一种玉米皮活性多糖组分与其制备方法，以玉米皮为原料，经微波预处理、超声波提取、除蛋白、脱色、Sephadex G-75柱层析、浓缩等工艺过程，可制备出玉米皮多糖类化合物提取率高达到8.16%、蛋白质脱除率达到80.42%、糖保留率为89.93%、对S180细胞的抑制率达到59.12%，是0.05mg/ml环磷酰胺的增值抑制率的1.431倍的玉米皮活性多糖组分。 成熟程度：中试技术 市场前景：本发明所开发具有抗肿瘤活性的多糖类功能因子组分，不仅可大大提高玉米非淀粉组分研究与开发的技术水平和玉米加工企业的经济效益，同时也可为玉米皮活性多糖产品开发与产业转化提供一条有效途径。