肾活检光镜制片切片染色技术规范.doc

肾活检光镜制片、切片、染色技术规范 一、取材 快速取材，取皮质（小红点，相对较粗）或皮质-髓质组织，一般大于10个肾小球。 二、制片 1.固定：A. Bouin液固定4小时。 B.福尔马林液固定1-2小时。 2.随常规组织脱水，透明，浸蜡，包埋。 3.切片 恒温恒湿：温度20℃-22℃，相对湿度60°（温度计和湿度计控制）。 连续切片，厚1微米。 贴片：每张玻片保持2-3条组织。 烤片温度60度，30分钟左右，PASM再90度烤40分钟以上。 注意事项： 取材要快，避免挤压。 定期更换试剂。 包埋平整。 三、染色 （一）HE 染色 切片常规脱蜡至水。 苏木素染细胞核10分钟，水洗。 1%盐酸分化1秒，水洗，蓝化液促蓝。 0.5%伊红染细胞浆5分钟。 逐级酒精脱水，TO透明，中性树胶封片。 （苏木素2.5克+纯酒精10毫升+硫酸铝钾25克+蒸馏水330毫升+碘酸钠0.25克+甘油150毫升+冰醋酸5毫升） （二）PAS染色 1. 切片常规脱蜡至水。 1%高碘酸氧化15分钟，水洗。 3. Schiff 氏液37℃10分钟（镜下控制），水洗。 4. 1%偏重亚硫酸钠分化1分钟，水洗。 5. 苏木素染核，盐酸分化，水洗。 6. 脱水，透明，封片。 （碱性品红1克+1N盐酸20毫升+偏重亚硫酸钠2克+蒸馏水200毫升+活性炭2克） （三）PASM-Masson染色 切片常规脱蜡至水。 Bouin液微波2分钟，水洗。 1%高碘酸氧化20分钟，水洗，蒸馏水洗。 1%偏重亚硫酸钠1分钟，水洗，蒸馏水洗。 六胺银液10-20分钟（根据病变镜下观察确定时间）。 2%硫代硫酸钠2分钟，水洗（必要时氯化金分化2秒），吹干。 Masson复染。 快速脱水，透明，封片。 （预温六胺银储备液20毫升+蒸馏水10毫升+5%四硼酸钠5毫升） （四）Masson-Trichrome染色 切片常规脱蜡至水。 Bouin液微波2分钟，水洗。 苏木素染核，盐酸分化，水洗，吹干。 丽春红酸性品红染2-3分钟（镜下控制），蒸馏水洗。 1%磷钼酸分化1分钟，直接甩干。 1%亮绿2-3分钟（镜下控制）。 1%冰醋酸30秒。 快速脱水，透明，封片。 （丽春红0.7克+酸性品红0.3克+冰醋酸1毫升+蒸馏水99毫升） 注意事项： 常规脱蜡要彻底。 Schiff氏液要4度保存，用前需复温。 PASM-Masson染色标本缸要干净、不挂水，切片要求烤40分钟90度，显微镜下控制染色深浅。 PASM-Masson染色复染前吹干，防脱片。