高致病性PRRSV毒株分离及PRRSV+RT-LAMP检测方法的分析.docxVIP

东北农业大学农学硕士论文 ３．１。４病毒的ＲＴ－ＰＣＲ鉴定……………………………………………………………………１９ ３．２ ＰＲＲＳＶ ＮＳＰ２和ＯＲＦ５６７基因的克隆及序列分析………………………………………．２０ ３．２．１ ＰＲＲＳＶ ＮＳＰ２片段基因的扩增结果…………………………………………………。２０ ３．２．２ ＮＳＰ２片段连接Ｔ载体后质粒的鉴定………………………………………………．．２１ ３。２．３ ＰＲＲＳＶ ３．２．４ ＰＲＲＳＶ ３．２．５ ＰＲＲＳＶ ＯＲＦ５６７基因的扩增结果……………………………………………………．２１ ＯＲＦ５６７片段连接Ｔ载体后质粒的鉴定……………………………………２２ ＪＩＬＩＮＴＮｌ和ＪＩＬＩＮｌＮ２株的序列分析………………………………………２３ ３．３ ＰＲＲＳＶ ＲＴ－ＬＡＭＰ检测方法的建立………………………………………………………．２８ ３．３．１ ３．３．２ ＲＴ－ＬＡＭＰ扩增产物的检测……………………………………………………………２８ ＲＴ－ＬＡＭＰ反应体系的优化……………………………………………………………２８ ３．３．３敏感性测定……………………………………………………………………………．２８ ３．３．４特异性检测……………………………………………………………………………２９ ３．３．５临床样本分析…………………………………………………………………………３２ ４讨论……………………………………………………………………………………………………………………………．３３ ４．１病毒的分离培养……………………………………………………………………………３３ ４．２病毒主要基因的克隆与序列分析…………………………………………………………３３ ４．３ ＬＡＭＰ……………………………………………………………………………………………………………………．３４ ５结论……………………………………………??……………………………………………………………………………．３５ 致谢……………………………………………………………………………………………………………………………．…．３６ 参考文献…………………………………………………………………………………………．．３６ 攻读硕士学位期间发表的学术论文……………………………………………………………．．４３  ＣＯＮＴＥＮＴＳ ＣｏＮＴＥＮＴＳ Ａｂｓｔｒａｃｔ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ……………………………………………………………………………………………………………ｌ Ａｂｓｔｒａｃｔ ｉｎ Ｅｎｇｌｉｓｈ…………………………………………………………………………………………………………．ＩＩＩ １．Ｉｎｔｒｏｄｕｅｔｉｏｎ…………………………………………………………………………………………………………………．．１ １．１ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ＰＲＲＳＶ…………………………………………………………………………。１ １．１．１ Ｇｅｎｏｍｉｃ ｓ仃ｕｃｔｍｅ ｏｆＰＲＲＳＶ…………………………???…………………………………………………１ １．２ Ｇｅｎｅｔｉｃ ｖａｒｉａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ＰＲＲＳＶ……………………………………………………………………………………４ １．２．１ Ｇｅｎｅｔｉｃ ｖａｒｉａｂｉｌｉｔｙ ｏｆｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ…………………………………………………………………．．５ １．２．２ Ｇｅｎｅｔｉｃ ｖａｒｉａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｎｏｎｓｔｍｃｔｕｒａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ……………………………………………………………．．５ １．３ Ｌｏｏｐ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ（ＬＡＭＰ）…………………………………………………………．．６ １．３．１ Ｔｈｅｏｒｙ ｏｆＬＡＭ【Ｐ………………………………………………………………………………………………．６ １．３．２ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｏｆＬＡＭＰ………………………………………………………………………………………６ １．３．３ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆＬＡＭＰ…………………………………………………………………………………………６ ２．Ｍａｔｅｒｉａｌｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ…………………………………………………………………………………………………．．８ ２．１ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ…………………………………………………………………………………………………………………．．８ ２．１．１ Ｐｌａｓｍｉｄ ａｎｄ ｂａｃｔｅｒｉａ…………………