对生叶序玉米转录组的分析及候选基因筛选及克隆.docx

获得１４个显著富集的ＧＯ ｔｅｒｍ，其中６条ＧＯ富集条目与植物生长发育或者激素代 谢相关。其中，最为显著的脂肪氧化酶活性和氧化还原酶活性与植物生长发育、赤霉 素合成等直接相关，且在对生都为上调；ＤＥＧｓ的Ｐａｔｈｗａｙ显著富集分析表明了共有 ８４９个ＤＥＧｓ参与１１７条代谢途径，以Ｑ．ｖａｌｕｅ ５０。０５为阀值，共有１５条显著富集， 其中参与植物激素信号转导的Ｐａｔｈｗａｙ中共有１９个ＤＥＧｓ，３个编码生长素代谢途径 的ＳＡＵＲ家族基因在对生中全部下调，３个编码参与细胞分裂素代谢的Ｂ．ＡＲＲ和 Ａ－ＡＲＲ反应调节因子基因在对生玉米中全部上调，这与前期对生玉米内源激素生理 特性分析相一致。 ３、结合玉米对生基因ＯＰＰ一１和ＯＰＰ．２的ＳＳＲ分子标记定位，利用转录组数据， 将１９个玉米对生叶序差异基因进???了染色体定位，利用比较基因组学和生物信息学 分析对染色体定位的差异基因进行了详细分析，其中１１个对生叶序差异基因具有同 源基因报道，但是蛋白都没有明确功能，为预测或未知蛋白。重点筛选确定了ＳＳＲ 标记定位之间的５个差异基因作为候选基因，启动子分析表明这些基因启动予区域发 现了多个与激素（生长素、赤霉素等）和光信号诱导相关的作用元件，可能在植物的激 素信号识别及传导过程中具有重要的作用。以对／互生ｃＤＮＡ为模板进行了这５个基 因的克隆，其中ＧＲＭＺＭ２Ｇ０７７７４４ Ｔ０１基因成功被克隆，经测序和氨基酸序列比对， 两者相似性为９７．３０％。进化树分析该基因在单子叶植物中高度保守，属于信号识别 颗粒蛋白，蛋白特征分析表明两者二级结构中无规卷曲具有差异，该差异是否会导致 相关基因功能变化还有待于进一步研究。 综上所述，本文利用ＲＮＡ．Ｓｅｑ技术构建了对／互生玉米转录组文库，筛选了差异 表达基因，并对差异表达基因的ＧＯ和Ｐａｔｈｗａｙ显著富集进行了分析，获得了与对生 叶序玉米有关的显著富集条目，同时结合前期对生基因的ＳＳＲ分子标记定位，利用 转录组文库数据筛选获得了５个玉米对生叶序候选基因并进行了克隆。研究结果为获 得玉米对生叶序调控基因，揭示玉米对生叶序形成的分子机制奠定基础。同时，对创 建对生玉米新种质、培育对生玉米新品种等都具有重要意义。 关键词：玉米，对生叶序，转录组，差异基因，候选基因，克隆 万方数据  Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｏｐｐｏｓｉｔｅ ｐｈｙｌｌｏｔａｘｙ ｍａｉｚｅ ｉｓ  ａｎｅｗ  ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｔｙｐｅ，ｗｈｉｃｈ ｉｓ ｅｘｔｒｅｍｅｌｙ  ｒａｒｅ  ｉｎ ｍａｉｚｅ．Ｉｔ ｉｓ ｔｈｅ ｖａｌｕａｂｌｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｍａｔｅｒｉａｌ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｐｈｙｌｌｏｔａｘｙ，ａｎｄ ｉｓ ａｌｓｏ ａ ｋｉｎｄ ｏｆ ｐｒｅｃｉｏｕｓ ｍａｉｚｅ ｇｅｒｍｐｌａｓｍ  ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ｗｈｉｃｈ ｈａｖｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｉｎ ｂｒｅｅｄｉｎｇ．Ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｏｐｐｏｓｉｔｅ ｐｈｙｌｌｏｔａｘｙ ｍａｉｚｅ ａｔ ｈｏｍｅ ａｎｄ ａｂｒｏａｄ ｍａｉｎｌｙ ｆｏｃｕｓｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ａｎｄ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｔｈｅｏｒｙ，ｔｈｅ ｏｐｐｏｓｉｔｅ ｐｈｙｌｌｏｔａｘｙ ｇｅｎｅ ｍａｐｐｉｎｇ ａｎｄ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｇｕｉｄａｎｃｅ ｏｆ ｈｏｒｍｏｎｅ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｇｅｎｅ，ｔｈｅ ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｅｘｐｌｏｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｌａｂｏｒａｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ｔｈｅｏｒｙ ｏｆ ｐｈｙｌｌｏｔａｘｙ ｍａｉｚｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｅｓ ｈａｖｅ ｂｅｅｎ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｂｙ ｔｈｅｓｅ ｒｅｓｅａｒｃｈｅｓ，ｂｕｔ ｌｅｓｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ． Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ，ｔｈｅ ｍａｔｅｒｉａｌ ｏｆ ｎｅａｒｌｙ ｉｓｏｇｅｎｉｃ ｏｐｐｏｓｉｔｅ ｐｈｙｌｌｏｔａｘｙ ｍａｉｚｅ（Ｈ４Ｄ）ａｎｄ ａｌｔｅｒｎａｔｅ ｐｈｙｌｌｏｔａｘｙ ｍａｉｚｅ（Ｈ４ｄ）ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ  ａ ｌｉｂｒａｒｙ ｏｆ ｏｐｐｏｓｉｔｅ－ａｌｔｅｒｎａｔｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ ｂａｓｅｄ ｏｎ Ｉｌｕｍｉｌｌａ／Ｓｏｌｅｘａ ＲＮＡ—Ｓｅｑ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， ｗｅ ｓｃｒｅｅｎｅｄ  ｏｐｐｏｓｉｔｅ—ａｌｔｅｒｎａｔ