低温沼气发酵优良菌系筛选及优势菌群的分析.docxVIP

ＩＩ ＩＰＨＩＩ ＩＨ ＩＩＩ ＩＩＩＩＩＩ ＰＩＩ Ｙ２３８６８４９ 摘要 沼气是清洁能源之一，近几年，在政策激励和资金支持下，我国农村户用型沼 气得到迅猛发展，然而人们对沼气发酵过程的控制还不完善，存在着沼气发酵启动 时间长、原料利用率低、工艺控制不合理等问题，其中低温条件下产气质量低的问 题是制约沼气事业发展的最重要因素之一。 由于沼气发酵涉及物料分解、产酸产氢和产甲烷等多种微生物，是一个非常复 杂的厌氧消化过程，研究明确优良沼气发酵体系的菌群结构，发现优势菌群是挖掘 利用优良微生物资源，指导沼气生产的关键。本研究以不同地区的沼泥为接种源， 通过阶段降温模拟沼气发酵试验，筛选低温条件下产气性能优良的接种源。以低温 沼气发酵性能不同的发酵菌系ＺＧ２、ＣＷｌ、ＨＬ２及对应的接种源ＺＧＢ、ＣＷＡ、ＨＬＢ 作为试验材料，通过ＰＣＲ－ＤＧＧＥ技术、基因克隆及测序技术，对沼泥中微生物菌 群结构多样性进行了分析，研究结果如下： １．从张家口沽源县，承德平泉县、围场县和邯郸临漳县采集低温下产气良好的 沼泥样品１２份：ＨＬＡ、ＨＬＢ、ＨＬＣ、ＺＧＡ、ＺＧＢ、ＺＧＣ、ＣＰＡ、ＣＰＢ、ＣＰＣ、ＣＷＡ、 ＣＷＢ和ＣＷＣ。以１２份沼泥为接种源，进行了１６ ｏＣ、１３ ｏＣ、１０ ｏＣ和５ ｏＣ五个温 度阶段、为期４０ ｄ的沼气发酵试验，通过总产气量、产气速率和甲烷含量三项指标 的比较发现，以采自张家口沽源县的沼泥样品ＺＧＢ为接种源的５号处理组表现出 最佳的低温沼气发酵性能，该处理组的沼气发酵总产气量为１５９１０．４ ｃｍ３，在１０ ｏＣ 条件下，其产气速率达到０．０４８ ｍ３／（ｍ３?ｄ），甲烷含量为６３％。 ２．参试样品中的微生物多样性十分丰富，但由于沼气发酵的接种物、原料和发 酵环境温度的不同，导致样品中微生物的菌群结构存在较大差异。样品中微生物的 相似性系数同样表明，沼气发酵条件和环境的不同将导致发酵体系中微生物结构的 多样性发生改变。 ３．经基因克隆和测序比对，样品中主要的优势菌属为甲烷八叠球菌属 （Ｍｅｔｈａｎｏｓａｒｃｉｎａ）、甲烷粒菌属（Ｍｅｔｈａｎｏｃｏｒｐｕｓｃｕｌｕｍ）和甲烷鬃毛茵属 （Ｍｅｔｈａｎｏｓａｅｔａ）。 ４．ＤＧＧＥ图谱中接种源ＺＧＢ和发酵菌系ＺＧ２样品中的７号条带为甲烷八叠球 菌属（Ｍｅｔｈａｎｏｓａｒｃｉｎａ）。此条带是ＺＧＢ和ＺＧ２样品中唯一位置相同的条带，而其 它样品在该水平位置处没有优势条带出现，推测甲烷八叠球菌是低温环境下维持沼 气池正常产气的关键菌群。 关键词：沼气；低温；ＰＣＲ．ＤＧＧＥ；产甲烷古菌；克隆  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｎｄ ｄｏｍｉｎａｎｔ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｓ仃ａｉｎｓ ｉｎ ｂｉｏｇａｓ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｌｏｗ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ Ａｕｔｈｏｒ．Ｋｏｎｇ Ｗｅｉ ｔａｏ Ｍａｊｏｒ：Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｓｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：Ｗａｎｇ Ｚｈａｎ Ａｂｓｔｒａｃｔ ｗｕ  Ｂｉｏｇａｓ ｉｓ  ｏｎｅ  ｏｆ ｃｌｅａｎ ｅｎｅｒｇｙ．Ｉｎ ｒｅｃｅｎｔ ｙｅａｒｓ，ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｐｏｌｉｃｙ ｅｎｃｏｕｒａｇｅｍｅｎｔ ａｎｄ ｔｈｅ ｆｉｎａｎｃｉａｌ ｓｕｐｐｏｒｔ，ｔｈｅ ｒｕｒａｌ ｈｏｕｓｅｈｏｌｄ ｂｉｏｇａｓ ｉｎ Ｃｈｉｎａ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｒａｐｉｄｌｙ． Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｒｅ ａｒｅ ｓｔｉｌｌ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｉｅｓ ｅｘｉｓｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ｂｉｏｇａｓ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ，ｗｈｉｃｈ ｉｎｃｌｕｄｅ ｉｎ ｔｅｒｍｓ ｏｆ ｌｏｎｇ ｓｔａｒｔｉｎｇ ｔｉｍｅ，ｌｏｗ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｒａｗ ｍａｔｅｒｉａｌｓ，ｉｍｐｒｏｐｅｒ ｐｒｏｃｅｓｓ ｃｏｎｔｒｏｌ，ｅｔｃ．Ｔｈｅ ｐｏｏｒ ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ ｂｉｏｇａｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｕｎｄｅｒ ｌｏｗ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｉｓ ｔｈｅ ｍａｉｎ ｆａｃｔｏｒ ｏｆｒｅｓｔｒｉｃｔｉｎｇ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆｂｉｏｇａｓ． Ｔｈｅ ｂｉｏｇａｓ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｉｓ ａ ｃｏｍｐｌｅｘ ａｎａｅｒｏｂｉｃ ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ，ａｓ ｉｔ ｉｎｖｏｌｖｅｓ ｍａｔｅｒｉａｌ ｄｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍｕｌｔｉ—ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ｓｕｃｈ ａｓ ａｃｉｄ， ｈｙｄｒｏｇｅｎ， ｍｅｔｈａｎｅ， ｅｔｃ．Ｔ