基于二代测序技术MEN2A全基因组测序的分析和6个EPPK家系基因突变谱及产前DNA诊断的研究.docx

浙江大学硕士学位论文致谢致谢时间匆匆，两年半的硕士生涯一晃而过。回苔在浙江大学度过的这段岁月，我在学＞－－ｊ、科研以及为人处世、生活态度方面都得到了很大的成长。首先，我要真诚地感谢我的导师张成宁教授。他严谨认真的治学态度，高尚的信仰，宽厚仁慈的的胸怀，敬业求实的教学态度值得我终身学习。对待学生严格要求但从不失关心爱护，尤记恩师回青海还特意给我们每个学生带来特产；对待疾病患者及亲属，他真诚热枕，亲切地接待询问，并多次亲自驾车送至车站，我作为学生，都看在眼里，敬佩在心里。他教了我许多知识，从科研方案的设计、实验技术的操作到论文的撰写，自始至终都倾注着老师的心血。非常感谢老师在学习与为人处事方面对我孜孜不倦的真心教导。相信在我在今后的学习工作以及生活上，将终身受益。衷心感谢解放军第一一七医院泌尿外科主任戚晓平教授给予我学术、为人处世以及肿瘤学研究方面的指导和大力支持。戚老师对科研的认真执着和严谨的拼搏精神，非常值得我们学习！感谢戚老师在最后论文的撰写方面给予极大的帮助！感谢赵坚强、李鹏飞老师在二代测序和学术上提供的帮助！衷心感谢浙江大学医学部的有关领导和老师（包括俞萍、陈小青、闫小毅、胡爱萍、阮思煜等）在实验材料、研究过程及校园生活等方面给予我的帮助！感谢实验室的各位同学！他们和我一起交流学＞－－ｊ，给我许多启发和无私的帮助。感谢陈晓玲、杜振方、刘文婷、赵燕、吕雅素、刘荣荣等师兄、师姐、师妹在这两年半时间里在生活和学习科研上的帮助与照顾，因为有他们的热情帮助与鼓励，我的论文才可以顺利完成。感谢所有帮助过我的、一直支持着我的同学（张子旺、王飞亚、纪冰琰、平泽朋等）、舍友（戴立恩、张菁）。因为有你们，我这两年半的研究生生活过得充实愉快。特别感谢本研究所涉及的所有患者及其亲属！他们不得不忍受着疾病所带来的巨大痛苦和折磨，却慷慨无私地大力支持我们的科研工作，毫不犹豫地无偿奉Ｔ万方数据浙江大学硕士学位论文致谢献血样、组织等，提供了多种方便。最后，感谢我的家人！无论拼搏多么辛苦，家人永远给予我最无私的支持与鼓励，是我最坚强的后盾，家是我最温暖的港湾。我将继续努力，回报所有关心、支持我的老师、亲人以及同学们！本论文的第一部分研究内容同时受２０１４年浙江省级公益性技术应用研究计划项日（２０１４Ｃ３３１８３）的资助，特此致谢！ＩＩ万方数据浙江大学硕士学位论文中文摘要基于二代测序技术的ＭＥＮ２Ａ全基因组测序分析和６个ＥＰＰＫ家系的基因突变谱及产前Ｉ）ＮＡ诊断研究浙江大学医学部硕士研究生遗传学姜湖铃导摘师要张成宁教授背景：（１）２型多发性内分泌腺瘤（ＭＥＮ２）是一种以甲状腺、肾上腺髓质和甲状旁腺内神经内分泌细胞发生增生或肿瘤为主要特征的肿瘤，一般呈常染色体显性遗传。ＭＥＮ２可分为３种亚型：２Ａ型（ＭＥＮ２Ａ）、家族性甲状腺髓样癌型（ＦＭＴＣ）和２Ｂ型（ＭＥＮ２Ｂ）。原癌基因ＲＥＴ是迄今发现的惟一与ＭＥＮ２发病相关的基因。其中，第６３４位氨基酸的点突变占ＭＥＮ２Ａ的８０％～９０％，又以ｐ．Ｃｙｓ６３４Ａｒｇ症状最为严重；（２）表皮松解性掌跖角化症（ＥＰＰＫ）是相对常见的致残性常染色体显性遗传性皮肤病，迄今无有效的临床治疗手段。本病主要由角蛋白ＫＲＴ９基因的突变造成，外显率１００％；少数患者由ＫＲＴｌ基因突变引起。目的：（１）利用全基因组测序技术（ＷＧＳ）在基因突变筛查中的高效性和全面性优势综合分析ＭＥＮ２Ａ疾病形成的分子病因，探究ＲＥＴ基因内含子、可变剪接区等的变异是否与ＭＥＮ２Ａ的发生、临床症状、肿瘤转移以及发病年龄有关；（２）绘制本研究所收集到的ＥＰＰＫ家系基因突变谱，分析ＥＰＰＫ表型与致病基因ＫＲＴ９基因型之间的相关性。顺应相关患者和亲属的强烈要求，在明确致病基因突变后，对胎儿进行产前ＤＮＡ诊断。方法：（１）收集了１个ＭＥＮ２Ａ家系（１１例家族成员），对先证者进行全基因组测序。过滤ｄｂＳＮＰ、１０００ＧｅｎｏｍｅＰｒｏｊｅｃｔ和ＨａｐＭａｐ等数据库，选取其中１个内含子的ＩｎＤｅｌ进行亚克隆测序验证。通过ＰＣＲ－ＤＮＡ测序对家系１１例成员进行ＲＥＴＴＴＩ万方数据浙江大学硕士学位论文进行ＲＥＴ基因２０个外显子的突变验证和多态性筛查。中文摘要（２）收集了６个ＥＰＰＫ家系。通过ＰＣＲ－ＤＮＡ测序及ＡＳ－ＰＣＲ、微卫星ＤＮＡ多态性连锁分析，筛查和验证相关ＫＲＴ９和ＫＲＴ／基因的突变。继而，对４个ＥＰＰＫ家系的高风险患病胎儿进行了产前ＤＮＡ诊断。结果：（１）通过对先证者的ＷＧＳ数据分析后发现，其ＲＥＴ基因第１１号外显子存在ｃ．１９００Ｔ＞Ｃ（ｐ．Ｃｙｓ６３４Ａｒｇ）突变．通过ＳａｎｇｅｒＤＮＡ测序法对ＭＥＮ２Ａ家系１１例成员进行筛查验证，发现ＩＩ：ｌ、１Ｉ：７和１１１：４存在该位点突变，证实了ＷＧＳ技术的精确性和高效性。亚克隆测序验证了ＩＩ：ｌ和１１：７存在ＲＥ