分子生物学新技术及应用.ppt

分子生物学新技术及其应用 温州医学院检验医学院 第一节 代谢组学及其研究进展 什么是代谢组学？ 代谢组学研究方法 代谢组学分析技术 气相色谱-质谱联用技术（GC-MS） 液相色谱-质谱联用技术（LC-MS） 毛细管电泳-质谱联用技术（CE-MS） 核磁共振技术（NMR） 一、代谢组学的概念 组学时代 代谢组学研究什么？？ 生物体系（细胞、组织或生物体） 代谢产物发生变化（种类，随时间变化） 普遍定义 代谢组学：通过考察生物体系（细胞、组织或生物体）受刺激或扰动后（如将某个特定的基因变异或环境变化后），其代谢产物的变化或其随时间的变化，来研究生物体系的一门科学。 研究对象：相对分子质量小于1000的内源性小分子。 代谢物小分子类别：多肽、氨基酸及其衍生物、胺、脂类、金属离子。 特点 1.关注于内源性小分子化合物。 2.对生物体系中的小分子化合物进行定性定量研究 3.内源性小分子化合物的上调和小调指示了与疾病、毒性、基因修饰或环境因子的影响。 4.内源性化合物的特点用来表征疾病和药物筛选。 研究方法 研究步骤： 应用： 药物研发 疾病研究 植物代谢组学 微生物代谢组学 中药现代化 分析技术 1.气相色谱-质谱联用技术（GC-MS） 工作原理： 几种新的GC-MS技术 全二维气相色谱质谱技术（GC×GC-TOFMS） 全二维气相色谱： 柠檬水中柠檬烯的手性化合物分析 研究实例： 2.液相色谱-质谱联用技术（GC-MS） 工作原理： 液相色谱-质谱联用的新技术 4000Q Trap LC/MS/MS Yang Jun 等运用安捷伦公司的高效液相色谱系统配合API公司的Q-TRAPLC液相质谱系统。研究50个健康人和慢性乙肝病人的血清样本，经过脱蛋白处理。经过去噪音，峰型尖锐化等处理。使用PLS-DA处理代谢数据，研究确定了代谢物标记分子。（Journal of Proteome Research, 2006, 5, 554-561）下图为分析结果： 新型液相色谱技术UPLC 比较（a）HPLC和（b）UPLC用于美沙芬的代谢物TOP质谱全扫描（Rapid Commun Mass Spectrom, 2005, 19, 843） UPLC在代谢组学中的研究优势： UPLC相对于传统的HPLC有更好的分离效率、峰容量、及灵敏度，提供更适合与质谱联用的接口，有助于检出更多的代谢物。 提高方法通量、灵敏度，改善与质谱联用的定性定量结果。 UPLC与质谱联用为代谢组学研究提供更加高效、灵敏的研究平台。 毛细管电泳-质谱联用技术（CE-MS） 代谢组学研究的生物样品中包含多种离子性代谢物（糖酵解代谢产物、三羧酸循环代谢物、如羧酸、磷酸化糖；以及核苷酸、氨基酸、辅酶等代谢物。） 毛细管电泳以毛细管为分离通道、采用高压直流电场为驱动力的的新型液相分离技术，通过离子化合物的质荷比（m/z）不同造成迁移速率不同来实现分离。 适用于普通反相色谱柱不易保留的离子性代谢物的分离分析。 第一节 代谢组学及其研究进展 核磁共振技术（NMR） 基本原理是：在排除杂质及水峰的干扰下，1H-NMR的谱峰与样品中的化合物的氢原子是一一对应的。所测的样品中的每一个氢在谱图中都有唯一的谱峰与之相对应。图谱中信号的强弱则反映出样品中各组分相对含量的关系，适用于研究代谢产物。 第一节 代谢组学及其研究进展 *Zhejiang Provincial Key Lab of Medical Genetics 分子生物学检验技术·第十章 基因表达 基因组 转录组 蛋白质组 代谢组学 第一节 代谢组学及其研究进展 特定基因突变 环境变化 生物体系 代谢组学研究对象 第一节 代谢组学及其研究进展 体内各种物质代谢过程互相联系形成一个整体 糖类 脂类 蛋白质 水 无机盐 维生素 各种物质代谢之间互有联系，相互依存。 消化吸收 中间代谢 废物排泄 第一节 代谢组学及其研究进展 机体物质代谢不断受到精细调节 机体有精细的调节机制，调节代谢的强度、方向和速度 内外环境的变化 对机体代谢造成影响 适应环境的变化 精细的调节控制 第一节 代谢组学及其研究进展 第一节 代谢组学及其研究进展 第一节 代谢组学及其研究进展 生物组织，体液经 灭活预处理 多个方法联用 第一节 代谢组学及其研究进展 第一节 代谢组学及其研究进展 连接图数据库 Connections Map DB 京都基因与基因组百科全书 KEGG (http://www.genome.jp/kegg/ligand.html) 生物化学途径 ExPASy 互联网主要代谢途径 main metabolic pathways on Internert, MMP Duke 博士植物化学