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猪肉中的瘦肉精检测——整体解决方案 猪肉中克伦特罗的检测 全自动固相萃取-定量浓缩仪，HPLC整体解决方案 摘要：使用LabTech公司全自动固相萃取仪-定量浓缩系统对经提取的猪肉样品提取液进行固相萃取—洗脱液浓缩—溶剂置换过程，简单高效，重现性好；经高效液相色谱检测克伦特罗，准确快速，标准曲线线性系数为：R2=0.9998，回收率高达89.53%，RSD：1.04%。 关键词：克伦特罗 固相萃取 定量浓缩 高效液相色谱 盐酸克伦特罗是一种β-兴奋剂，猪食用后在代谢过程中促进蛋白质合成，加速脂肪的转化和分解，提高了猪肉的瘦肉率，因此称为瘦肉精。它用量大、使用的时间长、代谢慢，所以在屠宰前到上市，在猪体内的残留量都很大。这个残留量通过食物进入人体，就使人体渐渐地中毒，积蓄中毒。如果一次摄入量过大，就会产生异常生理反应的中毒现象，因此而被禁用。国内养猪户不顾农业部的规定，为了使猪肉不长肥膘，在饲料中掺入瘦肉精。10% 碳酸钠溶液 0.1 mol/L 的盐酸溶液 2.5 mol/L 氢氧化钠溶液 甲醇（色谱级） 4% 氨水甲醇 去离子水 2 实验方法 2.1 提取方法： 将50 g 猪肉，平均分成10份，准确进行称重。取其中5份加入15 mL 乙酸乙酯、3 mL 10% 碳酸钠溶液置于50 mL 离心管中，10,000 rpm 下均质2 min，6,000 rpm 下离心2 min，将上清液转入另一离心管中。用15 mL 乙酸乙酯重复提取残渣，合并乙酸乙酯。向乙酸乙酯提取液中加入5 mL 0.1 mol/L 的盐酸溶液，涡旋混合1 min，然后在6,000 rpm 下离心1 min，收集下层水相。重复萃取一次，合并下层水相，用2.5 mol/L 氢氧化钠溶液调节pH 5.2。取另外5份，破碎后加入1.0μg/mL克伦特罗标准液1mL，按上述方法进行提取操作，作为加标样品。 2.2 样品净化 SPE 小柱： ProElut PXC 90 mg/6 mL a 活化： 依次加入4.5mL 甲醇、4.5 mL 水和4.5 mL 30 mmol/L 盐酸，对SPE柱进行活化； b 上样： 将提取液加入小柱中，流出液弃去； c 淋洗： 依次用4.5 mL 水和4.5 mL 甲醇淋洗，氮气吹干10min； d 洗脱： 7.5 mL 4% 氨水甲醇洗脱； e 在线浓缩 50 oC 下在线浓缩，进行流动相（甲醇+水=35:65）置换，自动定容到1mL。 图1 PrepElite-VS 方法设定界面 2.3 样品检测 2.3.1液相色谱条件 色谱柱：C18柱，250mm×4.6mm，5μm 流动相：甲醇：水=35:65 流速：1mL/min 进样量：20μL 紫外检测器：244nm 2.3.2 标准品及样品测定 克伦特罗标准溶液的配置：准确称取克伦特罗标准品用甲醇配成浓度为25μg/mL的标准储备液，用流动相甲醇+水（35:65）稀释浓度为0.025μg/mL、0. 05μg/mL、0.25μg/mL、1.0μg/mL、2.5μg/mL标准液。 将浓缩后的试样采用0.45μm的针筒式微孔过滤膜过滤，滤液待进行液相色谱测定。 吸取50μL标准溶液及试样液注入液相色谱仪，进行定性、定量分析。 3 结果和讨论 3.1 克伦特罗标准品的液相色谱图 图2 克伦特罗标准品（1.0μg/mL）色谱图 3.2克伦特罗标准品标准曲线 克伦特罗标准品浓度：0.025μg/mL、0. 05μg/mL、0.25μg/mL、1.0μg/mL、2.5μg/mL，线性方程为：Y=361552X-4061.8，线性系数为：R2=0.9998。 图3 克伦特罗标准品标准曲线图 3.3 加标样品回收率 加标样品回收率结果见下表1所示。 表1 加标样品回收率计算 样品号 克伦特罗浓度（μg/mL） 回收率(%) RSD（%） 1 0.9056 90.56 1.04 2 0.8975 89.75 3 0.8897 88.97 4 0.8823 88.23 5 0.9012 90.12 平均值 0.8953 89.53 图4 加标样品色谱图 3.4 未加标样品检测结果 未加标样品检测结果见图5所示，经计算，未加标样品未检出克伦特罗成分。 图5. 未加标样品色谱图 3.5 克伦特罗标准品（1.0μg/mL）、未加标样品、加标样品对比图 图6. 克伦特罗标准品、未加标样品、加标样品对比色谱图 4 结语 本实验采用LabTech全自动固相萃取-定量浓缩系统进行猪肉样品前处理，自动化程度高，可以解决传统固相萃取步骤操作繁琐，溶剂挥发，过柱流速难以控制等问题。同时，收集到的洗脱液可以在线浓缩、溶剂置换、定容过程，极大的简化了繁琐的样品前处理工作，保护操作者免受各种