蛋白质的质谱分析.pdf

蛋白质的质谱分析 王加付 (哈药集团制药总厂) 摘要：随着科学的不断发展，运用质谱法进行蛋白质的分析日益增多， 软电离技术的发展与完善，极性肽分子的分析成为可能，检测限下 本文简要综述了肽和蛋白质等生物大分子质谱分析的特点、方法及蛋白质 降到fmol 级别，可测定分子量范围则高达 100000Da ，目前基质辅 质谱分析的原理、方式和应用，并对其发展前景作出展望。 助的激光解吸电离飞行时间质谱法(MALDI TOF MS) 已成为测定 关键词：蛋白质 质谱分析 应用 生物大分子尤其是蛋白质、多肽分子量和一级结构的有效工具，也 0 引言 是当今生命科学领域中重大课题———蛋白质组研究所必不可缺的 蛋白质是生物体中含量最高，功能最重要的生物大分子，存在 关键技术之一。 目前在欧洲分子生物实验室(EMBL)及美国、瑞士等 于所有生物细胞，约占细胞干质量的50% 以上，作为生命的物质基 国的一些高校已建立了MALDI TOF MS 蛋白质一级结构(序列)谱 础之一，蛋白质在催化生命体内各种反应进行、调节代谢、抵御外来 库，能为解析FAST 谱图提供极大的帮助，并为确证分析结果提供可 物质入侵及控制遗传信息等方面都起着至关重要的作用，因此蛋白 靠的依据。 质也是生命科学中极为重要的研究对象。 3.3 蛋白质的质谱分析方式 质谱用于肽和蛋白质的序列测定 1 质谱分析的特点 主要可以分为三种方法：一种方法叫蛋白图谱(proteinmapping)，即 质谱分析用于蛋白质等生物活性分子的研究具有如下优点：很 用特异性的酶解或化学水解的方法将蛋白切成小的片段，然后用质 高的灵敏度能为亚微克级试样提供信息，能最有效地与色谱联用， 谱检测各产物肽分子量，将所得到的肽谱数据输入数据库，搜索与 适用于复杂体系中痕量物质的鉴定或结构测定，同时具有准确性、 之相对应的已知蛋白，从而获取待测蛋白序列。将蛋白质绘制“肽 易操作性、快速性及很好的普适性。 图”是一重要测列方法。第二种方法是利用待测分子在电离及飞行 2 质谱分析的方法 过程中产生的亚稳离子，通过分析相邻同组类型峰的质量差，识别 近年来涌现出较成功地用于生物大分子质谱分析的软电离技 相应的氨基酸残基，其中亚稳离子碎裂包括“自身”碎裂及外界作用 术主要有下列几种：① 电喷雾电离质谱；②基质辅助激光解吸电离 诱导碎裂.第三种方法与Edman 法有相似之处，即用化学探针或酶 质谱；③快原子轰击质谱；④离子喷雾电离质谱；⑤大气压电离质 解使蛋白或肽从 N 端或 C 端逐一降解下氨基酸残基，形成相互间 谱。在这些软电离技术中，以前面三种近年来研究得最多，应用得也 差一个氨基酸残基的系列肽，名为梯状测序(laddersequencing)，经 最广泛。 质谱检测，由相邻峰的质量差知道相应氨基酸残基。 3 蛋白质的质谱分析 3.3.1 蛋白消化 蛋白的基团越大，质谱检测的准确率越低。因 蛋自质是一条或多条肽链以特殊方式组合的生物大分子，复杂 此，在质谱检测之前，须将蛋白消化成小分子的多肽，以提高质谱检 结构主要包括以肽链为基础的肽链线型序列[称为一级结构]及由肽 测的准确率。一般而言，6- 20 个氨基酸的多肽最适合质谱仪的检 链卷曲折叠而形成三维[称为二级，三级或四级]结构。目前质谱主要 测。现今最常用的酶为胰蛋白酶(trypsin)，它于蛋白的赖氨酸(lysine) 测定蛋自质一级结构包括分子量、肽链氨基酸排序及多肽或二硫键 和精氨酸(arginine)处将其切断。因此，同一蛋白经胰蛋白酶消化后， 数目和位置。 会产生相同的多肽。 3.1 蛋白质的质谱分析原理 以往质谱(MS)仅用于小分子挥 3.3.2 基质辅助激光解吸电离