Caco-2细胞模型及其在食品营养物质吸收研究中的新进展.docVIP

Caco-2细胞模型及其在食品营养物质吸收研究中的新进展 【摘要】 概述了Caco-2细胞系的特点、模型的建立与验证，及其在营养物质吸收及机制 研究 中的新进展，并评价了其用于营养物质吸收转运中的优点与局限性。 【关键词】 Caco-2细胞 营养物质 吸收 　　Caco-2 Cell Model and Development of its Application to Absorption of Food Nutrients论文联盟www.LWLM.com编辑。 　　　Abstract：This article overviewed the characteristics of Caco-2 cell, establishment and validation of Caco-2 cell model. The research development of the mechanisms of absorption and transport of nutrients extensively was also reviewed. This model has many advantages, as well as few disadvantages. 　　Key words：Caco-2 cell; Nutrients; Absorption 对于营养物质在人体内的吸收转运及其生物利用度，不同的动物之间、动物与人之间都存在或大或小的质的差异。这种种属间的差异使得动物实验数据不能完全地外推至人体，并且直接利用人体组织进行研究是非常有限的。人类细胞培养系统作为肠屏障的体外模型的 应用 是模拟营养物质透过小肠黏膜的机制与 影响 因素的一个有效的 方法 。它可采用人体或与人体最接近的生物材料，从而消除了动物模型和人体的巨大差异；有利于探讨营养物质动力学-结构的定量构效关系的特点；有高通量、节省时间、节省资金、有利于对组合代谢产物进行 分析 的特点。近十几年来，国外已普遍采用组织细胞模型作为营养物质吸收研究的工具，包括有Caco-2细胞(the human colon adenocarcinoma cell lines)单层模型、MDCK细胞模型、MDR1-MDCK 细胞模型及ECV304细胞模型。其中尤其是Caco-2细胞模型以其与体内营养物质，特别是那些被动吸收的营养物质研究的良好相关性，被普遍用于营养物质开发的早期快速筛选过程中［1，2］。 　　1 Caco-2细胞模型概述 　　1.1 Caco-2细胞系及其特征 　　Caco-2细胞系于20世纪70年代首次分离自人类结、直肠癌细胞，Caco-2细胞模型最初是由Borchardt 和WorkeM在1989年提出的［3］。以普通的培养条件培养成熟的Caco-2细胞即可形成与小肠上皮细胞相同的细胞极性和致密的单细胞层组织，如图1所示,其形态和功能上与人体的小肠上皮细胞相似。在肠腔侧分化出绒毛面AP侧(apical，肠腔侧，又称黏膜剂)和基底面BL侧(basolateral，肠内壁侧，又称浆膜剂)。 AP面含有典型的小肠微绒毛水解酶和各种营养物质的转运载体，可发挥主动转运物质的作用，如糖类、氨基酸、二肽、胆酸及维生素B内源性因子的主动转运载体在Caco-2细胞都有表达；存在于小肠细胞刷状缘的酶，如氨肽酶、碱性磷酸酶、蔗糖酶及γ-谷氨酰转肽酶也同样存在于Caco-2细胞；I相代谢酶CYP1A1及Ⅱ相代谢酶谷胱甘肽S-转移酶，β-葡糖醛酸糖苷酶及磺基转移酶在该细胞系统的表达也都有报道［4］。 由于形态学及生化性质都与小肠上皮很相似，Caco-2细胞模型已被广泛地应用于体外营养物质分子肠吸收的研究。 　　1.2 Caco-2细胞模型的建立 　　1.2.1 Caco-2细胞的培养［5，6］将Caco-2细胞置于常规培养瓶内，以DMEM(Dulbeccos Modified Eagle’s Medium)为培养液：含4.5g·L-1D-葡萄糖、L-谷氨酰胺，不含丙酮酸钠和碳酸氢钠，1%非必需氨基酸、1%青霉素-链霉素、10%胎牛血清，pH值为7.2。在37、5%CO2气流下进行培养，隔1天更换1次培养液，每5天按1:3比例传代。 当细胞长至覆盖瓶底的80%～90%时，用含0.25%胰蛋白酶-0.02% EDTA 溶液消化。按2×105个/ml接种于Transwell上(为一种具有0.3 μm孔径的聚碳酸酯膜0.5 ml/孔，起支持Caco-2单层细胞的作用)。在Transwell的下腔加入培养液1.5 ml，如图2所示。接种后每两天换液1次，1周后每天换液。一般将第25～35代（培养21 d，满足跨膜电阻TEER300～500·cm2。）的Caco-2细胞用于吸收和代谢研究［7］。