一种简便高效的人胚胎干细胞转染方法_赵明.pdfVIP

DOI ：10.13523/j.cb 24 12 CHINA BIOTECHNOLOGY 2004 12 * 1 1 2 1 1 1** 赵 明 尹志华 蒋星军 杨旭宇 姚开泰 任彩萍 ( 1 410078 2 410008) 目的:利用Fugene 6 基因转染试剂建立一种简便高效的人胚胎干细胞转染方法, 并建立稳 定表达 强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGF ) 报告基因的人胚胎干细胞 系, 为人胚胎干细胞研究提供一个非常有用的细胞模型方法: 通过Fugene 6 基因转染试剂成功 地将EGF 基因转入无饲养层培养的人胚胎干细胞中, 嘌呤霉素筛选得到稳定表达EGF 的克 隆; 利用倒置荧光显微镜和流式细胞仪检测EGF 在人胚胎干细胞中的表达情况结果:EGF 瞬 4~ 5 时转染效率为30% ~ 40% , 稳定转染效率约1P10 , 且稳定转染的人胚胎干细胞均表达EGF 结论:Fugene 6 是一种良好的基因转染试剂, 它可以有效地将外源基因转入人胚胎干细胞中, 为 人胚胎干细胞的转基因研究提供新的实验手段 人胚胎干细胞 绿色荧光蛋白 基因转染 (embryonic stem cells, ES ) EGF ES (inner cell mass, ICM) 1 (primordial germ cells, GCs) 111 ES 11111 人 ES 细胞 , Thomson 23 H9 [1] , (NIH) ES 11112 EGF 表达质粒的构建 pBudCE411 [1] [2] 1998 , Thomson Shamblott (Invitrogen) 1A( human ICM GCs ES (HES) polypeptide elongation factor 1A, EF- 1A) ES ES , , pCMV-EGF ( (ES Bill Sugden ) CMV , EGF pEF-EGF (1) ) , ES , , , ES ES Fugene 6 EGF ES , :2004-07-05 :2004-09-23 * * * , :rencaiping@xysm. net 1 pEF-EGFP 90 24 11113 试剂和培 基 ES