海洋抑菌放线菌Y15的筛选、鉴定及其代谢产物理化性质.PDFVIP

微生物学通报 Mar. 20, 2017, 44(3): 513−524 Microbiology China /wswxtbcn tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.160195 研究报告 海洋抑菌放线菌 Y15 的筛选、鉴定及其代谢产物理化性质 * 张孟 王艳婷 汪立平 邬若鸣 常帅帅 ( 201306) 摘 要：【目的】筛选产广谱、高效抑菌活性物质的海洋放线菌，为新型抗生素的开发奠定基 础。【方法】采用琼脂块法初筛，打孔扩散法复筛，以金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、枯草 芽孢杆菌和单核细胞增生李斯特菌为指示菌从海泥样品中筛选目标菌株；利用 20 种指示菌株 考查 Y10 、Y11 、Y15 、Y16 和 Y21 的抑菌谱；通过形态观察和 16S rRNA 基因序列分析确定 菌株分类地位；以单核细胞增生李斯特菌的 OD600 值为指标探讨 Y15 抑菌活性物质对该菌的作 用方式；以抑菌活性为指标研究 Y15 抑菌活性物质的理化性质。【结果】共分离12 株具抑菌活 性的海洋放线菌，其中 Y15 抑菌谱最广，对 20 种指示菌株中的 18 种具有抑菌活性，并且在 4 种培养基中均能产生抑菌活性物质。16S rRNA 基因序列分析表明 Y15 属于小单孢菌属，并 与Micromonospora endolithica 亲缘关系最近。Y15 抑菌活性物质在 144 h 达到最高值为480 AU/mL ， 在 168−216 h 保持平衡为 320 AU/mL。Y15 抑菌活性物质对单核细胞李斯特菌作用方式为杀菌。 Y15 抑菌活性物质在−20−60 °C 抑菌活性保持稳定，在 80−120 °C 活性逐渐下降，但在 120 °C 处理 30 min 仍保留 37.5%的活性；在 pH 7.0−10.0 抑菌活性稳定，在 pH 2.0−6.0 和 pH 11.0−12.0 抑菌活性均有所损失；Y15 抑菌活性物质对紫外和 4 种酶(蛋白酶 K 、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和 α-淀粉酶)处理均保持稳定，表明活性物质为非蛋白和非多肽类的抑菌物质。【结论】Y15 产生 的活性物质具有良好的抑菌谱和抑菌活性，且较为稳定，具有较高的应用价值。 关键词：海洋抑菌放线菌，代谢产物，理化性质，抑菌谱，小单孢菌属 Foundation item: Shanghai Engineering Center Construction of Science and Technology Committee (No. 11DZ2280300) *Corresponding author: E-mail: lpwang@ Received: March 06, 2016; Accepted: June 08, 2016; Published online () : June 21, 2016 基金项目：(No. 11DZ2280300) *通讯作者：E-mail lpwang@ 收稿日期：2016-03-06 接受日期：2016-06-08 优先数字出版日期() ：2016-06-21 514 微生物学通报 Microbiol. China 2017, Vol.44, No.3 Screening, identification and characterization of marine antimicrobial actinomycetes Y15