DNA重组技术的基本工具张PPT.ppt

载体应具备的四个条件 (1)能在宿主细胞内稳定保存并自我复制。 (2)有一个至多个限制酶切点，以便与外源基因连接 (3)具有某些标记基因，以便进行筛选 （4）结构简单,独立于细菌外的DNA 目前常用的两类运载体 1.细菌的质粒，它是细菌染色体DNA以外的小型环状DNA(一般有1-200kb，kb为千碱基对)，有的细菌只有一个，有的细菌有多个 2.噬菌体和某些病毒的DNA。 以 质 粒 为 载 体 的 DNA 克 隆 过 程 小结 基因工程 的工具 限制酶 主要存在于原核生物中 具有专一性(识别序列) 切开DNA分子的磷酸二酯键 DNA连 接酶 连接磷酸二酯键 种类 E.coliDNA连接酶 T4 DNA连接酶 运载 工具 具备的 条件 结构简单,大小适中 能在宿主细胞中自 我复制并稳定存在 具一个至多个限制酶切位点 具标记基因 质粒、λ噬菌体衍生物、动植物病毒 1.以下说法正确的是 （ ） A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B、质粒是基因工程中唯一的运载体 C、运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接 D、DNA连接酶使黏性末段的碱基之间形成氢键 C 练习 2.不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A、能复制 B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA D * * * * * 选修3核心知识关系 生态工程原理 生态工程实例 生态工程 生态工程建设 基因工程 的诞生 蛋白质工程 基因工程应用 基因工程的原理及技术 基因工程 现代生物科技专题 植物的组织培养 动物细胞培养 体细胞克隆 细胞融合与单克隆抗体 细胞工程 转基因生物 的安全性 生物技术中的伦理问题 生物武器对人类的威胁 胚胎工程应用 胚胎工程理论基础 动物胚胎发育 胚胎干细胞移植 胚胎工程 转基因抗虫棉 抗虫棉 普通棉 棉花棉铃虫 属鳞翅目，夜蛾科。为害棉花时，幼虫食害嫩叶成缺刻或孔洞；为害棉蕾后苞叶张开变黄，蕾的下部有蛀孔，蕾苞叶张开变成黄褐色，2—3天后即脱落。1只幼虫常为害十多个蕾铃，严重的蕾铃脱落一半以上。 1.1DNA重组技术的基本工具 基因工程的概念 基因工程又叫做 或 。通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种 提取出来，加 以 ，然后放到另一种生物的细胞里， 改造生物的遗传性状。 基因拼接技术 DNA重组技术 基因 修饰改造 定向地 基因工程名称 基因拼接技术或DNA重组技术 实质:基因重组 操作环境 生物体外 操作对象 基因 操作水平 DNA分子水平 基本过程 “剪切”“拼接”“导入”“表达” 结果 人类需要的基因产物 基因工程的概念 这种技术是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切” 和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 与运载体DNA拼接 导入 棉花细胞(含抗虫基因) 棉花植株(有抗虫特性) 上述培育抗虫棉的关键步骤是什么？ 基因工程培育抗虫棉的关键步骤： 关键步骤一： 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 关键步骤二： 抗虫基因与运载体DNA连接 关键步骤三： 抗虫基因导入受体(棉花)细胞 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？ 关键步骤一的工具： 关键步骤二的工具： 关键步骤三的工具： 基因的剪刀——限制酶 基因的针线——DNA连接酶 基因的运载工具——运载体 DNA 重组技术的基本工具 “分子手术刀” ──限制酶 “分子缝合针” ──DNA连接酶 “分子运输车” ──基因进入受体细胞的载体 Hamilton O. Smith 1970年发现了限制性内切酶 Werner Arber Daniel Nathans 与这两位分享了1978年诺贝尔医学和生理学奖 限制性内切酶及其缓冲液 识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶。能将外来的DNA切断，由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性核酸内切酶。