实验十一还原糖含量的测定.docVIP

实验十一 还原糖含量的测定 还原糖是指具有还原性的糖类，葡萄糖、果糖、麦芽糖和乳糖等均为还原糖。还原糖的测定方法很多，其中最常见的方法有直接滴定法、高锰酸钾滴定法和铁氰化钾滴定法。本实验采用铁氰化钾滴定法测定还原糖的含量。 实验目的和要求 了解铁氰化钾滴定法测定还原糖的基本原理。 掌握铁氰化钾测定糖的操作及应用。 实验基本原理 在碱性介质中，一定量过量的铁氰化钾可将还原糖氧化为酸类物质，而铁氰化钾被还原成亚铁氰化钾，反应体系中剩余的铁氰化钾可用碘量法进行测定。反应如下： 6K3 Fe(CN)6 +C6 H12O6 +6KOH → 6K 4 Fe(CN)6 +(CHOH) 4 ·(COOH)2 +4H2 O 葡萄糖 葡萄糖二酸 2K3 Fe(CN)6 +2KI →2K 4 Fe(CN)6 +I2 I2 +2Na2 S2 O3 →2NaI+Na2 S 4 O 6 为避免第一步反应中生成的亚铁氰化钾对后面反应的干扰，可以加入硫酸锌使之生成配合物沉淀，反应如下： 2K4Fe(CN)+3ZnSO4 → K2Zn3[Fe(CN)6]2↓+3K2SO4 白色沉淀 仪器和试剂 主要仪器 移液管(10ml、5ml、2ml）、量筒（50ml、25ml、10ml）、微量滴定管（5ml、10ml、）、锥形瓶（10ml、150ml）、水浴锅。 试剂 95%乙醇溶液、0.5%淀粉溶液、酸性缓冲溶液、0.1mol/L硫代硫酸钠溶液、12%钨酸钠溶液、0.1%铁氰化钾溶液、乙酸盐溶液、10%碘化钾溶液。 实验步骤 样品液制备 准确称取5.675g粉碎试样（过40目筛）置于100ml锥形瓶中，将锥形瓶倾斜以使全部样品集中瓶底一侧，并用95%乙醇5ml润湿，再加入50ml酸性缓冲溶液，振荡使成悬浮液。立即加入2ml 12%钨酸钠溶液，振荡5min，立刻过滤，弃去最初的8~10滴，剩余的为还原糖提取液，收集于干燥洁净的锥形瓶中。 还原糖的测定 准确吸取5ml提取液放入100ml锥形瓶中，加入10ml 0.1mol/L铁氰化钾溶液，混匀，在沸水浴中准确加热20min，然后立即在流水中冷却，加入25ml乙酸盐溶液和碘化钾溶液，混匀，用0.1mol/L硫代硫酸钠溶液滴定成淡黄色，再加入0.5%淀粉溶液1ml，继续滴定至蓝色完全消失为止。记录用去的硫代硫酸钠溶液的体积（V1）。 用5ml蒸馏水代替样品提取液做空白实验，记录用去硫代硫酸钠溶液的体积（V2）。 样品和空白实验均需做2~3份平行实验。 结果处理 先求氧化还原糖所用的硫代硫酸钠溶液的体积V（ml）。 V=(V 2-V1 )K 式中 K——0.1mol/L硫代硫酸钠溶液的校正系数。 按V值查本实验表6，找出试样中所含还原糖的百分数。若在两数之间，可按插入法求得。 表6 0.1mol/Lt铁氰化钾溶液用量与还原糖含量数据对照表 六、说明 1、本实验结果不是根据测定时所用反应式及试剂的用量直接计算出来的，而是通过查经验数据表得到的。查表时所用的体积要校正系数K换算，K值与实际测定时的准确浓度有关。 2、本实验适合于粮食样品中小分子可溶性还原糖含量的测定。 七、思考题 1、本实验的基本原理是什么？ 2、影响本实验准确性的因素主要有哪些？ 八、实验试剂的配制 （1）酸性缓冲溶液 3ml冰醋酸、6.8g醋酸钠（或4.1g无水醋酸钠）与4.5ml相对密度为1.84的浓硫酸混合，然后用蒸馏水稀释至1000ml即可。 （2）12%钨酸钠溶液 12gNaWO用蒸馏水溶解后，稀释至100ml即可。 乙酸溶液 70g氯化钾与40g硫酸锌溶于750ml蒸馏水溶解中，加入200ml冰醋酸，再用蒸馏水稀释至1000ml即可。 10%碘化钾溶液 10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中，加入1滴饱和氢氧化钠溶液，装入棕色试剂瓶，存于暗处。 0.1mol/L硫代硫酸钠溶液 25g Na2WO4·5H2O和3.8g硼砂（Na2B4O7·10H 2O）溶于1000ml0沸过刚好冷却的蒸馏水中，8~10天后再进行标定。 0.1mol/L铁氰化钾溶液 32.9g铁氰化钾和44g无水碳酸钠溶于蒸馏水中，并稀释至1000ml，装入棕色试剂瓶，存入暗处。