NO14以潮霉素B抗性为选择标记的深黄被孢霉原生质体转化.pdf

23 卷 3 期 生 　物 　工 　程 　学 　报 Vol . 23 　No . 3 2007 年 5 月 Chinese J ournal of B iotechnology May 　2007 以潮霉素 B 抗性为选择标记的深黄被孢霉原生质体转化 　 Protoplast Transf ormation of Mortierella isabellina with Hygromycin B Resistance Plasmid PD4 张学炜 , 王笑梅 , 李明春 , 魏东盛 , 陈　雪 , 邢来君 ZHAN G XueWei , WAN G XiaoMei , L I MingChun , WEI DongSheng , CHEN Xue and XIN G LaiJun 天津市功能基因组学重点实验室 ,南开大学生命科学学院微生物学系 ,天津 　300071 Tianj in Key L aboratory of Microbial Functional Genomics , College of L fi e Sciences , N ankai University , Tianj in 300071 , China ( ) 摘 　要 　利用亚硝基胍 MNN G 诱变方法筛选了一株深黄被孢霉潮霉素 B 敏感型菌株 M6224 。采用 PEG 介导的方法 ,将含 有 E . coli 潮霉素 B 抗性标记的 PD4 质粒转入敏感株 M6224 原生质体 ,并在潮霉素 B 浓度为 400μ gmL 的选择培养基上筛选 μ 转化子 ,获得了 16～28 个转化子g 质粒 DNA 的转化频率 。稳定性实验表明 ,质粒线性化后所获得的转化子在 PDA 培养基 上传代 10 代以后 ,转接到选择平板上有 316 %仍具有 HmB 抗性 ;随机挑选了3 个转化子 ,通过 PCR 方法检测到潮霉素抗性基 因的存在 ,Southern 杂交发现 ,潮霉素抗性基因已经以 1～2 拷贝数整合到深黄被孢霉 M6224 染色体上 ,这是深黄被孢霉转化 系统的首次报道 。 关键词 　深黄被孢霉 , 潮霉素抗性 , 原生质体 , 转化 ( ) 中图分类号 　Q933 　　文献标识码 　A 　　文章编号 2007 Abstract 　A strain Mortierella isabellina M6224 ,which was sensitive to hygromycin B , was selected by treating parental spores ( ) with NmethylN ’NitroNnitrsoguanidine MNNG . Protoplasts of the strain Mortierella isabellina M6224 were transformed successfully to hygromycin B resistance using the PD4 plasmid , which contains the Escherichia coli hp h gene under the