阿司匹林肠溶片技术总结.pptVIP

* 实训四 阿司匹林肠溶片的含量测定 高效液相色谱法基本理论知识 高效液相色谱仪的组成 高效液相色谱仪的操作 实训操作：高效液相色谱法测定阿司匹林肠溶片的含量 液相色谱：经典液相色谱法 高效液相色谱法 高效液相色谱法 经典柱色谱法 高压输送流动相 无外加压力 固定相粒度小、分布均匀 固定相粒度大、分布不均 色谱柱长度固定，内径小 色谱柱长度差别大，内径大 安装了在线检测器 未安装在线检测器 分离效能高，分析速度快 分离效能低，分析速度慢 高效液相色谱法的特点 一、固定相：填充剂 1.特点： 颗粒细且均匀 传质快 机械强度高，能耐高压 化学稳定性好，不与流动相发生化学反应 高效液相色谱的基本原理 2.化学键合相：用化学反应的方法将固定液的官能团键合在载体表面，多用硅胶作为载体。 （1）非极性键合相 非极性烃基，如C18﹑C8﹑C1与苯基等键合在硅胶表面。 用于反相色谱。 ODS键合相 （2）弱极性键合相 醚基和二羟基等键合相 用于反相或正相色谱 （3）极性键合相： 常用氨基﹑氰基键合相（氰乙硅烷基≡Si(CH2)2CN)键合硅胶 一般用于正相色谱 3.化学键合相的特点 使用过程中不流失 化学稳定性好 适于梯度洗脱 载样量大 注意： 流动相的pH一般应在2-8，否则会引起硅胶溶解。 二、流动相：洗脱剂 1.要求 与固定相不发生化学反应 对试样有适宜的溶解度 纯度高，粘度小。 与检测器相适应。 2.流动相对分离的影响 n由色谱柱（固定相）性能决定 α主要受溶剂种类的影响，α=K2/K1=k2/k1 k受溶剂配比的影响。 3.洗脱方式 等度洗脱（等浓度洗脱） 流动相所用的溶剂种类与配比恒定。 梯度洗脱 在一定分析周期内，按一定程序，不断改变流动相的浓度配比。提高分离效果。 4.流动相的强度和选择性 流动性的极性与洗脱能力 正相色谱：溶剂极性越强，洗脱能力越强 反相色谱：极性弱的溶剂洗脱能力强 反相色谱首选纯溶剂：甲醇、乙腈和水的组合。 三、反相键合相色谱的分离条件 固定相　非极性键合相，如ODS 流动相　以水为基础溶剂，加入甲醇、乙腈等极性调节剂 弱酸、弱碱或缓冲盐作为离子抑制剂 加入0.1%－1%的醋酸盐、磷酸盐可减少残余硅醇基的作用 储液罐 控制系统 脱气 泵 进样阀 色谱柱 检测器 收集器 数据处理系统 自动 进样 仪器的重要组件 高压输液泵 输送流动相 柱塞往复泵 多元梯度洗脱装置 进样器 六通进样阀 自动进样器 色谱柱 高效液相色谱系统中最重要的组件 包括柱管和固定相 主要柱参数：柱长、柱内径、粒径 检测器 紫外检测器（UV）：应用最为普遍 固定波长、可变波长、二极管阵列（DAD） 蒸发光散射检测器：ELSD 仪器的操作 过滤溶剂、流动相并超声脱气 排气（开关、溶剂冲洗、Drain旋钮、Purge） 溶剂、流动相冲柱（更换溶剂时要重新排气） 打开检测器和色谱工作站（设置参数） 进样（过滤、反复润洗进样针、旋转手柄） 记录数据（保留时间、峰面积） 平衡系统 关闭仪器 溶剂过滤装置 Power Drain(Open) Purge Pump Power 实训操作 肠溶片：查阅药典（色谱条件；方法） 乙腈冲柱0.5h，流动相冲柱0.5h，进样 供试品，对照品的配制 记录峰面积 乙腈：水（10：90）冲柱1h，乙腈冲柱0.5h 实验数据 测定波长（nm） 流速（ml/min） 进样量（μl） 停止时间（min） 流动相组成 276 1 10 15 保留时间（min） 峰面积 对照品 ？ ？ 供试品 ？ ？ c=0.0100g/mL, W=1.4634g, m=0.0103g， S=mg/片 已知数据 c=0.1003mg/mL, W=1.4670g, m=0.0098g， S=25mg/片 已知数据 *