流式微珠阵列法检测IFN-γ诱导的Jurkat细胞Th1-Th2细胞因子表达.docVIP

流式微珠阵列法检测IFN-γ诱导的Jurkat细胞Th1/Th2细胞因子表达 【摘要】 本 研究 旨在探讨流式微珠阵列法检测Th1/Th2细胞因子表达及IFN-γ 应用 于T淋巴细胞白血病 治疗 的临床价值。以不同浓度IFN-γ诱导培养Jurkat细胞48小时，用流式微珠阵列法检测培养上清液中IL-2、IL-6、TNF-α和IFN-γ表达，并采用流式细胞术检测膜上IL-2受体（CD25）的表达。结果表明： IFN-γ诱导Jurkat细胞IL-2和TNF-α的表达呈浓度依赖性升高，未检测到IL-6表达，CD25表达明显升高。结论： Jurkat细胞能被IFN-γ诱导高表达Th1细胞因子和CD25，流式微珠阵列法能准确客观地反映Th1/Th2细胞因子表达的动态变化。 【关键词】 T淋巴细胞白血病 　　Detection of Expression of Th1/Th2 Cytokines in Jurkat cell Treated with γ-Interferon by Cytometric Bead Array 　　Abstract In order to explore the value of γ-interferon (IFN-γ) in therapy of T lymphoid leukemia and role of cytometric bead array (CBA) method in detection of Th1/Th2 cytokines expression，the Jurkat cells were cultured for 48 hours in different concentration of IFN-γ，the expressions of IL-2，IL-6，INF-γ and TNF-α in culture supernatants were assayed by CBA method; CD25 expression was assayed by flow cytometry. The results showed that the expressions of IL-2，TNF-α were enhanced in INF-γ dose-dependent way，and the expression of CD25 was also enhanced，but there was no expression of IL-6. It is concluded that Jurkat cells induced by IFN-γ were able to express high-level of Th1 cytokine and IL-2 membrane receptor (CD25)，and the CBA method can be used to exactly evaluate the dynamic change of Th1/Th2 cytokines. 　　Key words cytometric bead array; Th1/Th2 cytokine; IFN－γ; T lymphoid leukemia 流式微珠阵列（cytometric bead array，CBA）是近年来 发展 起来的新技术，可在一份标本中同时检测多达10种细胞因子（IFN-γ、TNF-α、TNF-β、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10），具有快速、简便、准确的特点，而且灵敏度高（可达0.3 pg/ml），可以准确反映Th1/Th2平衡状态［1-4］。有学者认为，IFN-γ可应用于T淋巴细胞白血病治疗，但 目前 为止并无确凿的实验证据。Jurkat细胞株为T淋巴瘤研究常用模型，因此本研究组以流式微珠阵列法检测IFN-γ诱导的Jurkat细胞Th1/Th2细胞因子表达，同时检测mIL-2R（IL-2膜上受体，CD25）表达，探讨IFN-γ的抗肿瘤效应及作用机制。 　　材料和 方法 　　材料 　　RPMI 1640液体培养基（杭州科达生物公司产品），临用前加入15%小牛血清（杭州四季青生物工程公司产品）； Jurkat 细胞株（ 中国 科学 院上海细胞生物学研究所提供）； IFN-γ（上海克隆生物高技术有限公司生产）； 流式微珠阵列细胞因子检测试剂盒（Bender Medsystems产品，Austria）；CD25 FITC单克隆抗体（美国Becton Dickinson公司产品）。 细胞培养 　　以含15%灭活小牛血清的完全RPMI 1640培养液，于37、5% CO2、饱和湿度下培养Jurkat细胞，每2-3天换液，取对数生长期的细胞