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白桃汤剂治疗Lewis肺癌小鼠的实验研究 作者：曹志友 王爽　欧阳瑾 王新成 雷钧涛 【摘要】 目的探讨白桃汤剂对Lewis肺癌模型小鼠的 治疗 作用及机制。方法复制C57BL/6小鼠Lewis肺癌模型，将40只小鼠随机分成4组：分别为生理盐水组(A组)、白桃汤剂低剂量组(B组)、白桃汤剂高剂量组(C组)、顺铂(DDP)组(D组)，连续用药10 d，观察移殖瘤生长情况，并采用放射免疫法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6 (IL-6) 的水平。结果A组瘤体质量最重，与其他组比较差异均有显著性意义(P＜0.01)。D、C组均可升高血清TNF-α水平(与A组比较， P＜0.01或P＜0.05)，B、C组可显著降低IL-6水平(与A组比较，P＜0.01)。结论白桃汤剂的抑瘤作用可能与其能升高血清TNF-α水平，降低IL-6水平，提高免疫功能有关。 【关键词】 白桃汤剂 肺肿瘤 疾病模型 小鼠 　　当前，肺癌居我国城市人口肿瘤发病率的首位，已成为恶性肿瘤发病率和死亡率最高的肿瘤疾病，迄今尚无有效的治疗方法。目前医学界普遍认为，提高肺癌疗效的措施是进行多学科综合治疗，其中中医药治疗占有重要地位。白桃汤剂为民间祖传秘方，曾为不少病人解除过病痛，临床治愈率达76%。本实验观察白桃汤剂治疗Lewis肺癌小鼠的疗效及机制，旨在为该药在临床上的进一步应用提供 科学 依据。 1 材料与仪器 1.1 细胞株 小鼠Lewis肺癌细胞系(LLC)，为小鼠高转移和耐药肿瘤细胞株(购于中科院上海细胞库)。 1.2 动物 C57BL/6纯系小鼠，6～8周龄，体重（18±1）g，雌雄各半，吉林省长春市生物制品研究所提供(合格证号:0004088)。 1.3 试剂与仪器 细胞因子中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)检测采用核素放免法，试剂盒由解放军总 医院 科技开发中心放免所提供；SN-695B型放免γ测量仪(上海日环仪器厂)；10%胎牛血清（FBS）（杭州四季青公司），DMEM培养基、胰酶（美国GICBO公司）。CO2恒温孵箱（日本SHEL-LAB公司），倒置显微镜（重庆光学仪器厂）。 2 方法 2.1 药物 白桃汤剂方由核桃皮15 g，白附子15 g，甘草10 g，黄芪20 g等组成（吉林医药学院自制）。按常规方法制成1 g/ml保存备用。注射用顺铂（DDP）（齐鲁制药厂生产，国药准字，10 mg/瓶，，用生理盐水稀释成0.2 mg/ml。 2.2 方法将小鼠Lewis肺癌细胞置于含10%胎牛血清及DMEM的完全培养液中，在37，5%CO2培养箱中培养，2～3 d更换一次培养液，0.25%胰蛋白酶消化传代。细胞总数达到要求后，台朌蓝拒染法测定活细胞数＞95%，调节细胞浓度为5×106/ml的细胞悬液备用。 造模：取40只小鼠，雌雄各半，体重（18±1）g，于腋后线第6肋间胸腔接种，每只接种0.2 ml，细胞计数为5×106 个细胞/ml。建立小鼠肿瘤动物模型。 造模2 d后随机分成4组，每组10只。生理盐水组(A组)：给予生理盐水0.2 ml灌胃，1次/d；白桃汤剂低剂量组(B组)：0.2 ml药液灌胃（相当于40 mg/kg），1次/d；白桃汤剂高剂量组(C组)：0.6ml药液灌胃（相当于120 mg/kg），1次/d；顺铂(DDP)组(D组),用量1 mg/kg，腹腔注射，1次/d，同时以生理盐水0.2 ml灌胃。各组均连续给药10 d。第12天处死全部小鼠进行指标检测。 2.3 观察指标 2.3.1 一般检测 观察接种前后各组小鼠的饮食情况、活动、毛色、大便状况等，绘制肿瘤生长曲线，完全剥离肿瘤称重， 计算 抑瘤率：抑瘤率（%）=（生理盐水组瘤重-治疗组瘤重）/生理盐水组瘤重×100%。 2.3.2 瘤组织病 理学 变化取瘤组织10%甲醛固定,常规石蜡包埋、切片，HE染色，光镜观察；细胞因子TNF-α，IL-6水平检测，按试剂盒说明进行检测。 2.4 统计学处理 所有数据用±s表示，采用组间t检验，多样本均数间多重比较的方差分析及q检验，数据分析采用SPSS10.0统计软件完成。 3 结果 3.1 药物对肿瘤生长的影响 接种后前两天移植瘤生长基本相同，从第5天开始，生理盐水组移植瘤生长明显快于其他组，病程中小鼠活动减少，睡眠减少，皮毛失去光泽，常有蜷曲、脱落现象。各用药组对移植瘤生长均有抑制作用，各组对Lewis肺癌小鼠肺癌组织的抑制作用见表1。 表1 各组给药后的瘤体重量及抑瘤率的比较与A组比较，* P＜0.01；与B组比较，P＜0.01；n =10 3.2 移植瘤组织病 理学 变化 移植瘤呈圆形、椭圆形或分叶状生长，质地硬，