白细胞介素12通过调整Th1-Th2细胞因子平衡抑制肺纤维化.docVIP

白细胞介素12通过调整Th1/Th2细胞因子平衡抑制肺纤维化 【摘要】 目的： 研究 白细胞介素12(Interleukin12，IL12)对博莱霉素(Bleomycin，BLM)致大鼠肺纤维化的 治疗 作用及机制. 方法 : 采用完全随机设计将雌性Wistar大鼠60只随机分为4组, 即BLM模型组（1组）、IL12干预组（2组）、BSA治疗对照组（3组）及生理盐水（NS）对照组（4组）. 第1,2,3组经气管注入BLM制备肺纤维化（PF）大鼠模型,第4组给予同等体积的NS. 制模后第1～12日腹腔注射干预药物,第2组为IL12溶液，第3组为牛血清白蛋白（Bovine Serum Albumin，BSA）溶液，制模后第7，14，28 日每组各处死5只大鼠，观察其病理改变、肺脏重量、肺组织匀浆中羟脯氨酸(Hydroxyproline，Hyp)水平及肺系数的变化，对病理切片进行肺泡炎和纤维化评分和灰度百分比 分析 . 测定支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid，BALF)中白细胞介素4(Interleukin4，lL4)、γ干扰素(Interferongamma，INFγ)水平， 计算 IL4/INFγ比值. 结果: （1)与第4组比较,第1组出现明显肺泡炎及纤维化, 肺脏重量、肺系数、肺组织匀浆中Hyp含量增加，肺泡炎及纤维化评分增高，BALF中IL4增加、IL4/INFγ比值增高，差异有统计学意义(均P0.05)；灰度分析示7,14 d深染区百分比增加（P0.01），7 d时浅染区百分比增加（P0.05），但是BALF中INFγ减少(P0.05)；（2) 第3组各个指标同第1组比较差异无统计学意义；（3) 第2组与第1，3组比较肺泡炎及纤维化程度均减轻,7，14 d时的肺泡炎评分、深染区百分比以及28 d时肺纤维化评分、浅染区百分比减少，肺脏重量（7 d时）、肺系数、Hyp含量，BALF中IL4含量减少， IL4/INFγ比值减低，差异有统计学意义(均P0.05)，但是INFγ含量增加（P0.01）. 结论： IL12 能通过调整Th1/Th2型细胞因子的平衡而对BLM所致大鼠肺纤维化发挥抗肺纤维化作用. 【关键词】 白细胞介素12 肺纤维化 白细胞介素4 干扰素型 羟脯氨酸 Th1细胞 Th2细胞 　　0引言 　　肺纤维化（Pulmonary fibrosis，PF）过程中存在着1型辅助性T细胞(Th1)和2型辅助性T细胞(Th2)细胞因子间的失衡,这种失衡与肺纤维化的形成有一定关系. IL12可以促使Th1细胞的增殖分化产生Th1型细胞因子，抑制Th2细胞的增殖分化. 一般认为IL4（代表Th2型细胞因子）、INFγ（代表Th1型细胞因子）及IL12的相互作用是维持Th1与Th2细胞平衡的关键，形成了Th1细胞与Th2细胞之间的相互抑制［1］. 本文观察了Thl/Th2细胞因子在肺纤维化形成过程中的变化，探讨IL12是否具有调节Thl/Th2细胞因子失衡从而达到抗纤维化的作用. 　　1材料和方法 　　1.1材料 　　健康清洁级雌性Wistar大鼠60只，购自重庆医科大学动物实验中心，体质量（155±10）g. 博莱霉素(Bleomycin，BLM)，日本化药株式会社生产；IL12购自美国Biosource国际公司；牛血清白蛋白（Bovine Serum Albumin，BSA）全组分，购自上海百萃生物有限公司；羟脯氨酸(Hydroxyproline，Hyp)试剂盒，购自南京建成生物工程研究所；IL4和INFγ ELISA试剂盒购自北京晶美生物制品有限公司. 　　1.2方法 　　1.2.1动物的分组及制模将大鼠60只随机分为4组：BLM模型组（1组）、IL12干预组（2组）、BSA治疗对照组（3组）及NS对照组（4组）. 第1，2，3组经一次性气管内灌注4 g/L的 BLM(5 mg/kg)制备肺纤维化模型，第4组灌注相同体积的生理盐水. 模型建立后第1～12日腹腔内注射干预药物，第2组为1 μg重组大鼠IL12（溶于100 μL的2 g/L BSA溶液），第3组为100 μＬ的2 g/L BSA溶液. 制模后第7，14，28 日每组各处死5只大鼠留取标本. 　　1.2.2标本的收集及处理将大鼠麻醉后心脏穿刺放血处死，称取体质量，左肺用手术线结扎，右肺反复行支气管肺泡灌洗并回收灌洗液，灌洗液混匀后-70分装冻存. 灌洗结束后取双肺，冲洗，滤纸吸干水分后称取肺脏质量. 右肺-70冻存，左肺待作病理切片，行HE和Masson三色染色. 检测时取少量右肺组织用碾磨的方法制作肺组织匀浆，按照试剂盒说明采用碱水解法测定Hyp含量. 取BALF按照ELISA试剂盒说明测定IL4，I