真养产碱杆菌的化学破胞过程-真养产.PDFVIP

维普资讯 … 高 … 学 报 N0lV01．13 Feb 1999 真养产 无锡轻工 鬟物 釜 嘶 关键词 真养产碱杆菌 化学破胞 破胞剂 作用 过程 、 — - — — - ～ ～ 1引 言 甲HB 近年来，利用真养产碱杆菌(Alcafigeneseutrophus)生产生物可降解高分子聚睁-羟基丁酸酯 (poly—B．hydroxybutyrate，PliB)的研究已引起人们的极大兴趣，其中出现了很多破碎真养产碱杆菌 的技术…。前人研究了机械法破碎真养产碱杆菌过程中的蛋白质及 DNA释放规律口I，但对于化学 破胞过程的研究，尚来见报遭 。 本文将首先研究用表面活性剂一络合剂水溶液破胞真养产碱杆菌 【I过程中破胞剂各组分单独 或同时存在时对破胞的影响，然后对破胞过程中的蛋白质和 DNA 的释放规律进行研究，以期得 到蛋白质和DNA释放的初步规律。 2 细胞破胞及其测定 2．1 材料 培养基及培养方法：见本研究室发表的论文l4I。菌种为A．eutrophusWSH3。 含有 PHB 的菌体在培养结束后，经离t[,．(2500rpm，15rain)、去离子水洗涤、冷冻干燥后保存 于一4℃的冰箱中。菌体中PHB的含量为菌体干重的70％。 化学试剂：各种试剂都为分析纯，水为二次去离子水。 2．2 细胞破胞 最佳条件下的破胞：1．2克表面活性剂和O8克络合剂溶于500毫升的去离子水中，用 NaOH 调 pH至 13 向其中加人 lO克菌体，在恒温 50~C及恒速 1000rpm下搅拌。定时取样并在 10000rpm下离心 】5分钟后，取上清液测定可溶性蛋白及DNA的含量。 单个试剂或混合试剂作用下的破胞：只加入被考察的试剂，其它条件同上。 2．3 分析方法 蛋 白质含量测定：Folin-酚法 ：。 DNA含量测定：二苯胺显色法㈧ 19盯 0904收到初稿 I99B02．17收到任改稿 联系^ 蒜坚 怍 胨铋r 男 B岁 ．博二L生 ·鞋 L总 {技 盘 国家 自然科学基盅项目 维普资讯 真养产碱杆菌的化学破胞过程 83 为消除较高温度及pH对蛋白质及 DNA测定的影响．标准曲线的测定是在相应提取条件下进 行的，其中选用酩蛋白为标准蛋白。最大蛋白质和 DNA释放量的测定是在最佳提取条件下进 行，只是选用pH为 l4(在此条件下破胞较完全 )。 3 结果与讨论 对于真养产碱杆菌的破胞，研究者们习惯采用测定可溶性蛋白或 DNA的释放作为细胞破碎 的量度 “．因为这样的测定比较方便。有文献报道 ．用机械破胞法从真养产碱杆菌提取 PHB 的过程中，较小程度的破胞就能促使胞内蛋白的释放，而 DNA 的释放需要较深程度的细胞破 裂，PHB的释放一般介于两者之间。因此，本研究采用测定可溶性蛋 白和 DNA在细胞破碎过程 中的释放量来了解破胞过程的进展。 3．1 破胞剂的作用 由于破胞剂含有多个组分，有必要先研究每个组分的单独作用对蛋白质及 DNA释放的影 响，结果如图 1和图2所示。由图 1和图2可以初步得出结论，碱或碱性条件是使真养产碱杆菌 破胞的必要条件。 口 P ■ 图1各组分的单硅作用对蛋白质释放的影响