瞬时感受器电位通道vanilloid4在机械牵张.PDFVIP

中南大学学报（医学版） 2015, 40(9) htt p:// 960 J Cent South Univ (Med Sci) DOI:10.11817/j.issn.1672-7347.2015.09.003 /xbwk/fi leup/PDF/201509960.pdf 瞬时感受器电位通道 vanilloid 4 在机械牵张 人脑微血管内皮细胞中对内皮型一氧化氮合酶的作用 蒲九君，王志明，周辉，钟艾凌，阮伦亮，靳凯，杨刚 ( 重庆医科大学附属第一医院神经外科，重庆 400016) [摘要] 目的：筛选人脑微血管内皮细胞 (human brain microvascular endothelial cells ，HBMEC) 中瞬时感受器电位 (transient receptor potential ，TRP)通道亚型，检测该通道亚型在机械牵张刺激中对内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase ，eNOS)蛋白表达的影响及探讨相关机制。方法：荧光定量RT-PCR (qRT-PCR) 、Western 印迹及细胞免疫 荧光筛选HBMEC上TRP通道亚型。根据筛选的TRP通道亚型将细胞分组，应用多功能小型生物撞击机给予机械牵张 刺激；流式细胞仪检测细胞牵张前后胞内Ca2+荧光强度变化；Western 印迹检测eNOS蛋白表达情况。结果：qRT-PCR 结果表明：TRPV4及TRPC1 的mRNA相对表达量较多；细胞免疫荧光及Western 印迹显示TRPV4通道蛋白表达；流式细 胞仪检测结果显示，特异性TRPV4通道抑制组较单纯牵张组Ca2+相对浓度低(P 0.001) ，较未牵张组(P=0.072) 、非特异 性TRP通道抑制组(P=0.308)无明显差异。Western 印迹检测结果显示：TRPV4通道抑制组和内皮型一氧化氮合酶抑制 组eNOS蛋白表达水平较单纯牵张组明显降低(P 0.05) ，较未牵张组无明显差异(P 0.05)。结论：TRPV4在HBMEC上有 表达，机械牵张将其激活后，可以引起eNOS蛋白表达增多，其机制可能与胞外Ca2+ 的内流有关。 [关键词] TRPV4 ；机械牵张刺激；内皮型一氧化氮合酶 Role of TRPV4 channels in regulation of eNOS expression in brain microvascular endothelial cells under the condition of mechanical stretch PU Jiujun, WANG Zhiming, ZHOU Hui, ZHONG Ailing, RUAN Lunliang, JIN Kai, YANG Gang (Department of Neurosurgery, First Affiliated Hospital of Chongqing Medical UniversityChongqing 400016, China) ABSTRACT Objective: To identify the subtype of transient receptor potential (TRPs) channel involved in stretch-induced injury of human brain microvascular endothelial cells (HBMEC) and to explore the mechanism responsible for eNOS expression. 收稿日期(Date of reception) ：2015-05-21 第一作者(Fi