淀粉酶活性测定（副本）.doc

淀粉酶活力测定及性质研究 佟玥姗 （东北农业大学，生命科学学院，生物科学，黑龙江省，哈尔滨市，150030） 摘要：本文以小麦为原料进行试验，分别采用凝胶扩散法，3,5—二硝基水杨酸比色法测定小麦α—淀粉酶活性和总酶活性。首先，制作麦芽糖标准曲线，提取淀粉酶粗酶液，从温度、PH、激活剂及抑制剂对淀粉酶活性的影响。然后，通过剩余淀粉的含量判断淀粉酶水解效果，淀粉遇碘变蓝，颜色越深，淀粉含量高，淀粉酶活性越低。结果表明，40℃时酶活性最佳，PH=5.6是淀粉酶最适温度，氯离子是淀粉酶的激活剂，铜离子是淀粉酶的抑制剂。 Taking wheat as raw material to test and gel diffusion method were used respectively, 3, 5-2 nitro salicylic acid colorimetric method to determine the wheat a - amylase activity and total enzyme activity. First, the production of maltose standard curve, extracting amylase thick enzyme fluid, from temperature, PH, the influence of activator and inhibitor on the amylase activity. Then, by the content of residual starch amylase hydrolysis effect, starch iodine blue in color, high starch content, the lower the amylase activity. The results showed that the activity of 40 ℃ best, PH = 5.6 is the optimum temperature for amylase, chloride ion is the activator of amylase, copper ion is amylase inhibitors. 关键词：淀粉酶活性；最适PH，最适温度；激活剂及抑制剂‘ 引言： 小麦是我国乃至全世界的主要粮食作物之一,其种植历史长、范围广,因而对于小麦品质的 研究具有广泛的意义。在小麦的收获季节,遇到连绵阴雨天,就会出现大量的穗上发芽的现象,使小麦的品质严重下降,明显降低小麦的食用品质和工艺品质. 据报道,加拿大年产小麦约2500 万t.。芽麦率严重时可达15%,澳大利亚也有相似的芽麦率,欧洲几乎每年的芽麦率都相当高。 在我国也经常出现这种情况a -淀粉酶只有在小麦发芽时才能大量产生。正常情况下,小麦籽粒中缺少a-淀粉酶,a-淀粉酶的活性与发芽时的温度、发芽时间存在着密切的关系。 同时发芽小麦中由于a-淀粉酶活性很高,淀粉便会在a-淀粉酶的作用下分解成小分子,再进一步水解成糖类,所以低分子糖类含量也相应较高。本课题研究淀粉酶活性受温度，PH值，激活剂及抑制剂的影响。【1】 1 实验材料与方法 1．1材料 小麦（Triticum aestivum L.）、电子天平、研钵、容量瓶、量筒、刻度试管、试管、移液管、离心机、离心管、恒温水浴锅（40度、100度）、分光光度计、1％淀粉溶液、0.4mol/L NaOH、pH=3.0、5.6、8.0的柠檬酸缓冲液 1. 2方法 1.2.1麦芽糖标准曲线的制作? 取7支干净的具塞刻度试管，分别编号1、2、3、4、5、6、7。依次分别加入麦芽糖标准液0mL、0.2mL、0.6mL、1.0mL、1.4mL、1.8mL、2.0mL，蒸馏水2.0mL、1.8mL、1.4mL、1.0mL、0.6mL、0.2mL、0mL，3,5-二硝基水杨酸各2.0mL。（麦芽糖含量依次为0mg、0.2mg、0.6mg、1.0mg、1.4mg、1.8mg、2.0mg）药品加好后摇匀，置于水浴中煮沸5min，取出后流水冷却，加蒸馏水定容至25mL，以1号管作空白调零点在520nm波长下比色测定光密度，以麦芽糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线。 1.2.2淀粉酶粗酶液的提取? 称取0.5克萌发的小麦种子（芽长1cm左右）至研钵中加1g石英砂，研磨成匀浆，倒入25ml具塞刻度的试管中，用蒸馏水稀释至刻度线处，混匀后在室温（20℃）下静置，每隔数分钟震荡一次，放置5分钟后，开始离心（4000r/min）10分钟，取上清液备用。 1.2.3温度对酶活性影响 准备8支试管分别编号A、a、B、b、C、c、D、d，分别