稀土金属离子及牛血清白蛋白结合反应的研究.pdf

27№3 第27卷第3期 河北师范大学学报(自然科学版)Vol 1111兰!旦 !竺：型篁竺堕竺竺!竺!兰矍竺!型!竺!塞!竺!!竺竺! ．———竺坠垒竺兰一 稀土金属离子与牛血清白蛋白结合反应的研究 秦身钧， 申金山，李艳廷，魏永巨 (河北师范大学化学学院．河北石家庄050016) 摘要：分析了牛血清白蛋白(BsA)对稀土铽离子的荧光敏化增强效应首次用敏化荧光法确定了铽离 子与BsA的结合位点类型和结合位点数，表明铽离子与BsA至少有2类结合方式．第1类结合位点数为2； 以铽离子为探针．测定了其他稀土离子对Tb2BSA体系敏化荧光的猝灭，发现稀土离子与BSA的结合呈现 “四分组效应”，钇离子的位置向轻稀土方向移动． 关■词：血清白蛋白；稀土离子；荧光敏化 中阻分类号：Q512+l文献标识码：A 文章编号：1000．5854(2003)03—0274—04 随着对稀土元素的不断开发和利用，促使人们进一步探讨稀土金属离子的生物代谢过程，研究稀土 金属离子与生物大分子的相互作用，同时稀土金属离子也是一种研究生物大分子体系的有效探针．Brit． tain等发现许多种蛋白可以不同程度地敏化Tb”的特征荧光，其原因是芳香族氨基酸残基向Tb”的 非辐射能量转移[“．利用Tb”荧光敏化研究Tb3+与钙调蛋白[2J、酶【31的相互作用已有文献报道；但在 稀土离子一血清白蛋白研究体系中，已往的研究多为根据F缸ter理论求取稀土离子到色氨酸(Tfp)残 基的距离H，5J，以及利用个别稀土离子对牛血清白蛋白(BsA)的荧光猝灭推断结合情况【6’7]，而尚无直 接应用稀土离子荧光敏化增强进行研究的报道．本文中，笔者研究了BsA对Tb”的荧光敏化增强现 象，推断出了=者的结合位点类型和结合位点数；以Tb3+为探针测定了其他稀土离子对Tb2BsA体系 敏化荧光的猝灭，通过竞争反应的难易程度横向比较出不同稀土离子与BsA结合的强弱，并探讨了稀 土离子与BSA的结合规律，对于研究稀土离子的生物效应具有重要参考价值． 1材料与方法 11仪器与试剂 (Eppen如rf，德国)． 稀土氧化物(纯度均大于99．99％)，用浓盐酸数滴小心加热溶解，待水分蒸发近干，配制成0．02 配制． 1．2实验方法 m01几Tris—HCl缓冲液以维持离子强度和pH=6．30．向1cm荧光池中准确加入2mL上述溶液，用微 量进样器间断注入所需体积的REcl3溶液．以150w氙灯为光源，扫描速度60nm／min，激发及发射狭 缝均为5cm，室温下测定荧光光谱． 收藕日期：2002一儿一14；惨回日期．2002一12—24 基盒项目：河北省自然科学基金资助项目(200153) 作青简介：秦身均(1977一)，男，河北邯郸人，河北师范大学碗士研究生，研究方向为生物元机化学 万方数据 2∞ 第3期 秦身钧等：稀土金属离子与牛血清白蛋白结合反应的研究 2结果与分析 2．1 Tb2BSA的荧光光谱 nm没有激发峰出现，而Tb2BsA(c) Tb2BsA的激发和发射光谱如图1所示，Tbcl3溶液(a)在296 则出现了明显的激发峰，与相同条件时BsA溶液(b)的峰相比，强度增加，且略有红移；TbCl3溶液和 BsA溶液在544 l中544nm发射波长对应于5D。一7F5的能级跃迁． ^，nm ^／nm aTbcl3．bBsA；c1bBsA；c(BsA)=5．0×105mol／L；c(Tb3+)=1×10—4m01几