酶促合成二氢杨梅素酯化物及其纯化的研究.pdfVIP

第 31卷第 4期 湖 北 工 业 大 学 学 报 2016年 O8月 VoI．31NO．4 JournalofHubeiUniversityofTechnology Aug．2016 [文章编号]1003—4684(2016)04—0089—04 酶促合成二氢杨梅素酯化物及其纯化的研究 吴 欢 ，李 卫。，郭 巍 ，陈爱洋 ，朱 林 ，万端极 (1湖北工业大学资源与环境工程学院，湖北 武汉 430068；湖北 武汉 430068； 2湖北工业大学食 品与制药工程学院，湖北 武汉 430068) [摘 要]采用雪白根霉脂肪酶催化二氢杨梅素和乙酸 乙烯酯合成二氢杨梅素单酯化物 ，探索不同溶剂作为酶促酯 化 的反应体系，确定最佳 的反应体系为 ：以乙腈为溶剂 ，雪 白根霉脂肪酶的量为 500U，乙酸乙烯酯与二氢杨梅素的 物质的量之 比为 15～2o，温度 45℃，时间24～36h。二氢杨梅素转化率最高可达 83．6 ，利用薄层层析法分离出 二氢杨梅素单酯化物的条件 ： (氯仿)： (丙酮)： (乙酸)=60：38：2，二氢杨梅素单酯化物 的纯度可达 96 。 [关键词]二氢杨梅素 ；脂肪酶 ；酯化反应 ；转化率 [中图分类号]TS21 [文献标识码]：A 二氢杨梅素 占藤茶茎 叶干重的30 以上，是藤 主要仪器和设备 ：恒温空气浴摇床 TS一211B，北 茶的主要活性物质_】]，其特殊结构决定它具有一定 京天翔仪器设备有 限公司；台式高速离心机 TLL— 的亲水性，而油溶性较差 ，导致其抗氧化活性和抑菌 C，上海精密仪器仪表公司；真空干燥箱 DZF一6050， 性等作用在多种应用方面受到限制 ]。研究表 明， 北京 兴争 仪器 设备 厂；高 效液 相色 谱仪 Ulti— 选择合适 的酰化剂对二氢杨梅素进行酯化反应 ，可 Mate3000，上海禾木仪器有限公司；Nexus一870傅立 解决其难溶于油 的问题 ，其抗氧化、抗病毒 、抗肿瘤 叶变换红外光谱仪 ，海雪弘仪器有 限公司；安捷伦 等活性也会有所增强 ]。 6240质谱一1200液相 ，上海雪弘仪器有限公司。 本研 究首次将雪 白根霉脂肪酶作为催化剂 ，研 1．2 二氢杨梅素酯化物合成方法 究乙腈 、丙酮 、四氢呋喃、叔丁醇 、二甲基亚砜等作为 在 10mL带塞三角瓶 中各加入 2mL溶剂，加 溶剂 ，以及底物摩尔 比、温度 、酶量和时间等不同因 入一定量的乙酸乙烯酯和二氢杨梅素 ，在合适温度 素对反应 的影响 ，将二氢杨梅素转化率和初始转化 和转速的条件下 ，反应一定时间，取样 ，用 甲醇水溶 率作为考察指标 ，选取最佳反应条件。考查薄层层 液稀释至 100倍 ，离心 (15000r／min)15rain后 ，取 析法分离 出二氢杨梅素单酯化物的条件 ，为二氢杨 上清液 (20 L)，供高效液相色谱分析 。 梅素酯化物的工业化酶催化合成二氢杨梅素酯化物 高效液相色谱 的检测方法 ：流动相 A 为乙腈 ， 的生产和应用提供理论基础 。 流动相 B为 0．1 的乙酸水溶液 ；梯度洗脱程序 ：0 ～ 8min，28 ～3O 乙腈 ；8～15rain，30 ～8O 1 实验部分 乙腈 ；15～25rain，80 ～28 乙腈 (体积 比)；流速 1．1 实验材料与主要仪器 为 1mL／min；进样量 20 “L。 主要原料和试剂 ：二氢杨梅素，纯度 98％；甲