植物细胞融合(实验)要领.pptVIP

第六章 植物细胞融合（实验） 二、细胞融合（cell fusion)概念 在外力（诱导剂或促融合剂）作用下，两个或两个以上的异源细胞或原生质体相互接触，从而发生膜融合、胞质融合和核融合并形成杂种细胞的现象。 通过细胞培养技术，这个细胞有可能发育成完整的生物个体，这个杂种后代有可能兼有两个上代的一些优良性状。 实际操作： 先把待融合的细胞或原生质体混合，取样置于100V/cm的高频交流电场中，在非均匀交流电场中形成项链状排列； 再用1~5V/cm直流电脉冲/微秒冲击细胞或原生质体的粘接点，细胞膜降解造成若干微孔，于是在膜之间形成通道，使细胞质得以交换；最后导致新的球状细胞的形成。 四、实验材料、试剂和仪器1.材料 无菌烟草叶片、洋葱根尖 3.仪器 1）大型仪器： 高压灭菌锅，超净工作台，离心机，倒置显微镜，电融合仪。 五.实验步骤实验路线： 纯化的原生质体图示 完整烟草原生质体（40×） PEG法原生质体的融合图示 电融合法原生质体的融合结果 原生质体融合（图1） 电融合法原生质体的融合结果 原生质体融合（图2） 6.原生质体的密度测定 用血细胞记数板记数。每一样品测定3次，根据测定结果，将悬浮原生质体密度调整至5*105个/ml。 7