第三篇 大肠杆菌基因工程-3.pptVIP

表达产物的后处理路线： S S S S C N 胰蛋白酶 C peptide A peptide B peptide M R R K R CNBr R S S S S C N N C S S S S R 羧肽酶B B链中第22位上的Arg和第29 位上的Lys由于良好折叠的原 因，对胰蛋白酶不敏感 人胰岛素原（BCA）表达法 A链和B链同时表达法 tac b-Gal ori Apr Met Met M M N C B peptide A peptide 化学合成AB链编码序列 重组人胰岛素 转化 分离纯化 CNBr 处理 特异性裂解 体外折叠 1、试述大肠杆菌表达系统工程菌构建技术路线及工程菌鉴定内容。2、工程菌质粒不稳定性的表现形式和机制是什么？有哪些改进策略？ 3、如何进行工程菌遗传稳定性分析？分析项目包括哪些？什么是质粒的宏观逃逸率？如何测定？ 4、工程菌常规保存条件为何？菌种库包括哪几种形式？相互关系如何？5、影响工程菌发酵的主要因素有哪些？什么是工程菌的生长曲线和表达曲线？最佳诱导时机在工程菌生长曲线中的什么时期？ 6、工程菌工业发酵工艺流程如何？发酵工艺研究需要解决的主要问题是什么？如何实现大肠杆菌高密度发酵？ 7、表达产物分离纯化研究的主要内容和原则是什么？? 8、大肠杆菌系统表达产物粗提工艺包括哪些内容？ 9、表达产物精纯的主要任务是什么？为什么主要采用色谱柱