4 2 基因组的复制及修复.pptVIP

Ch3. DNA Replication, Repair DNA复制反应的共同特点 1. 有特定的复制起点； 复制子（复制单元） 2. 需要引物；（3’-OH） 3. DNA合成的单向延伸 5’→3’ ；  4.半保留复制； semi-conservative  以母链为模板，合成新的互补链 5. 半不连续复制； Discontinuous synthesis  6. 复制受控制 7. 复制真实性；  复制方式Replication modes 双链环状 线状DNA的复制 线状DNA复制的一个重要问题是末端RNA引物消除后如何补齐？ ① 形成环状DNA进行复制 λ -phage  ② 形成聚合体 T7 DNA ③ 末端形成发夹结构 痘病毒 不用RNA引物 复制方向 单向 双向 先单后双 真核生物DNA的复制 ? 与原核生物相似 半保留、半不连续复制 复制过程：引发—延伸—终止三个阶段 需要酶和蛋白因子 ? 不同点 复制特性上 复制酶 复制过程 真核生物的复制特点： 1. 原核生物是单复制子(大），真核生物是多复制子（每条染色体上有多个复制起点，小）； 2. DNA全部复制完毕才进行第二轮复制，原核生物在第一轮复制未完成就进行第二轮复制。 Replication complexes during the cell cycle 从复制速度可知，如果所有复制子同时复制，一个哺乳动物细胞基因组可以在~1小时内复制。 但一个普通体细胞的S 期就持续6 小时. 说明? 在任何给定的时间内只有不超过15%的复制子复制。 参与DNA复制的酶： DNA聚合酶 真核生物DNA聚合酶有5种，DNA聚合酶α，β，γ(线粒体复制），δ，ε，其中与核DNA复制有关的酶是DNA聚合酶α和δ。其他因子可能与DNA的修复，重组等过程有关。真核生物中还存在ζ、η、ι和κ等几种DNA聚合酶，它们承担着修复损伤的功能，但这些修复酶的忠实性都很低。 DNA聚合酶α 是DNA复制的主要酶，由4个亚基组成，分子量分别是160~185kd、70kd、60kd和50kd，除具有5’ → 3’的聚合酶活性外，还有引物酶活性是一个双功能酶，但无3’ → 5’ 外切活性。 DNA聚合酶deltaδ 由2个亚基组成，125kd和25kd，既具有3’ → 5’ 外切酶活性，又有5’ → 3’的聚合酶活性，是前导链合成的主要酶类。 δ酶需要一个37kd的辅助蛋白促进δ酶与模板/引物相互作用。——PCNA分裂细胞核抗原，它是控制细胞分裂的“细胞周期调控蛋白”的一种，研究发现，PCNA表达水平高，DNA聚合酶活性高，细胞分裂、复制旺盛。Breast cancer PCNA (proliferating cell nuclear antigen) Properties of DNA polymerases DNA polymerases of humans a b g d e Location nucl nucl mito nucl nucl Replication yes no yes yes (no) Repair no yes no no yes3 Functions 5’ to 3’ polymerase yes yes yes yes yes 3’ to 5’ exonuclease no no yes yes yes 5’ to 3’ exonuclease1 no no no no no Primase yes no no no no Associates with PCNA2 no no no yes no Processivity low high Strand synthesis lagging rep