03动物细胞染色体标本制作及组型实验.ppt

小鼠染色体标本制作及组型实验 NO. 3 细胞生物学实验 2016.4.13 实验目的 1.通过实验，初步掌握染色体标本的制做方法，进一步了解各操作步骤的原理； 2.通过组型实验，掌握染色体组型分析的基本方法。 实验原理 小鼠精巢细胞分裂旺盛； 秋水仙素使有丝分裂停止在中期； 空气干燥使中期染色体展平； 一、染色体标本的制做 实验原理 染色体组型代表了一个个体或物种的染色体特征； 参数： 分类： 二、染色体组型分析 相对长度 指数 着丝粒指数 染色体的臂数 中央着丝粒染色体 亚中央着丝粒染色体 端部着丝粒染色体 亚端部着丝粒染色体 实验用品 1. 材料：小白鼠。 2. 试剂： 秋水仙素 Carnoys固定液 磷酸缓冲液 3. 器材：显微镜、普通离心机、恒温水浴锅、剪刀、镊子、滴管、量筒、小烧杯、试管架、染色用玻璃板、载玻片、盖玻片。 生理盐水 Giemsa染液 实验方法 一、染色体标本的制做 1. 取小白鼠以每克重注射秋水仙素4?g，注射后14~16h，用断头法杀死小鼠，取出睾丸用生理盐水洗去血污。 2. 把睾丸移入盛有1ml 0.3% KCl的低渗溶液的10ml的小烧杯内，用手术剪将睾丸剪碎(呈乳白色)，将其用铜网过滤至一支10ml刻度离心管中以除去残余组织块，向离心管中加入0.3% KCl低渗溶液至4ml，于37℃水浴中低渗处理30min。 3. 800~1000r/min离心8min。 4. 轻轻地去除上清液, 加入2ml新配制的Carnoys固定液(甲醇:冰醋酸=3:1), 立即用吸管轻轻将细胞吹散，室温固定8min。 5. 800~1000r/min离心8min。 6. 弃去上清液，加入1ml新制Carnoys固定液，用滴管轻轻将细胞吹散，制成细胞悬液。 7. 取出预冷的干净载玻片，以10~15cm的高度向载玻片上滴加2~3滴细胞悬液，并立即吹打载玻片。 8. 用滤纸吸去载玻片上多余的水分后，将载玻片文火烤干或空气干燥。 实验方法 9. 向10ml磷酸缓冲液中加入4~5滴Giemsa原液，以配制成Giemsa使用液。 10. 在玻璃板上用废旧载玻片作支架, 使标本载玻片的标本面向下放置到支架上, 在玻璃板和标本载玻片之间滴加Giemsa染液, 室温染色30~35min。 11. 染色后的标本载玻片用流水冲洗1~2min，以冲洗掉多余的染液。 12. 文火烤干后，进行显微镜观察。 13. 选择染色和分散较好、比较直且周缘清晰的分裂相染色体，封片后在油镜下进行显微照相，并冲洗出照相底片。 一、染色体标本的制做 实验方法 1. 选择染色体清晰的照相底片，用放大机制作出放大10倍的清晰照片。 2. 将染色体逐一剪下，并对每个中期染色体逐一进行测量，包括每条染色体的长度和每个臂的长度。 3. 根据测量数据，计算出每对染色体平均的相对长度、臂指数与着丝粒指数。 4. 把相对长度与臂指数相近者配成一对。 5. 参照相对长度、臂指数与着丝粒指数的数值，并根据标准顺序，编排出染色体组型图。 6. 用胶水或浆糊将每条染色体依照标准顺序粘贴在实验报告纸上。 二、染色体组型分析 实验结果 1.显微镜下，染色体被染成紫红色，胞浆完全不着色。对于分散好的染色体, 其间相互散开, 短臂收缩适中, 二条姐妹染色单体大致平行分离, 着丝粒清晰可见。 2.小鼠的染色体数为40条，多为端部和亚端部染色体，只有2对亚中部着丝粒染色体。 作业 1. 用一种活体染色剂对细胞进行超活染色，为什么不能同时观察到线粒体、液泡系等多种细胞器？2.小麦或黄豆根尖经中性红超活染色，为什么看到生长点的细胞中液泡多，而且染色深，延长区细胞中液泡数量变少，染色浅？  染色体组型又名核型，是指根据染色体的长度、形态和着丝粒的位置将中期染色体依照所规定的标准顺序和组次予以系统排列而成的模式图，它代表了一个个体或物种的染色体特征。 * 染色体组型又名核型，是指根据染色体的长度、形态和着丝粒的位置将中期染色体依照所规定的标准顺序和组次予以系统排列而成的模式图，它代表了一个个体或物种的染色体特征。 *