液质联用(LCMS)原理简析资料.pdf

液质联用（LCMS）原理简析 1.质谱法 质谱分析是先将物质离子化，按离子的质荷比分离，然后测量各 种离子谱峰的强度而实现分析目的的一种分析方法。质谱的样品一般 要汽化，再离子化。不纯的样品要用色谱和质谱联用仪，是通过色谱 进样。即色谱分离，质谱是色谱的检测器。离子在电场和磁场的综合 作用下，按照其质量数 m 和电荷数 Z 的比值(m/z，质荷比)大小依次 排列成谱被记录下来，以检测器检测到的离子信号强度为纵坐标，离 子质荷比为横坐标所作的条状图就是我们常见的质谱图。 2.质谱仪 质谱仪由以下几部分组成 数据及供电系统 ┏━━━━┳━━━━━╋━━━━━━┓ 进样系统 离子源 质量分析器 检测接收器 ┗━━━━━╋━━━━━━┛ 真空系统 质谱仪一般由进样系统、离子源、分析器、检测器组成。还包括 真空系统、电气系统和数据处理系统等辅助设备。 （1）离子源：使样品产生离子的装置叫离子源。液质的离子源有ESI， APCI，APPI，统称大气压电离(API)源，实验室常用液质的离子源为 ESI 源。 电喷雾（ESI）的特点 通常小分子得到[M+H]+ ]+,[M+Na]+ 或[M-H]-单电荷离子，生 物大分子产生多电荷离子。 电喷雾电离是最软的电离技术，通常只产生分子离子峰，因此 可直接测定混合物，并可测定热不稳定的极性化合物；其易形 成多电荷离子的特性可分析蛋白质和 DNA 等生物大分子；通过 调节离子源电压控制离子的碎裂（源内 CID）得到化合物的部 分结构。 （2）质量分析器： 由它将离子源产生的离子按 m/z分开。离子通过 分析器后,按不同质荷比(M/Z)分开,将相同的 M/Z 离子聚焦在一起, 组成质谱。 质量分析器有：磁场和电场、四极杆、离子阱、飞行时间质谱、 傅立叶变换离子回旋共振等。实验室目前液质的质量分析器类型：三 重四极杆（QqQ）： 离子源→第一分析器→碰撞室→第二分析器→接收器 MS1 MS2 Q1 q2 Q3 QqQ 仪器可以方便的改变离子的动能，因此扫描速度快，体积 小，常作为台式进入常规实验室，缺点是质量范围及分辨率有 限，不能进行高分辨测定，只能做到单位质量分辨。 在液质联机中使用的碎片化手段，能量都是以碰撞的形式输送 给分子离子，这个能量足以使得处在能量亚稳态分子中的某些 化学键断裂并使一些特定的分子发生结构重排。 （3）碰撞诱导解离 CID质谱： QqQ 检测器中的碰撞反应在CID 中进行。选择一定质量的离子作 为母体离子，进入碰撞室，室内充有靶子反应气体(本实验室选择高 纯氦) ，发生离子—分子碰撞反应，从而产生‘子离子’，再经 MS2 的 分 析 器 及 接 受 器 得 到 子 离 子 质 谱 ， 一 般 称 做 CID (collision-induced dissociation)谱。 （4）检测器：离子检测器由收集器和放大器组成。打在收集器上的 正离子流产生与离子流丰度成正比的信号。 （5）真空系统：质谱仪的离子源、质量分析器和检测器必须在高真 空状态下工作，以减少本底的干扰，避免发生不必要的离子-分子反 应。所以质谱反应属于单分子分解反应。利用这个特点，我们用液质 联用的软电离方式可以得到化合物的准分子离子，从而得到分子量。 由机械真空泵(前极低真空泵)，扩散泵或分子泵(高真空泵)组成真空 机组，抽取离子源和分析器部分的真空。只有在足够高的真空下，离 子才能从离子源到达接收器，真空度不够则灵敏度低。实验时要注意 观察质谱的真空度状态，如有异常，及时向相关老师汇报。 3. 质谱仪的联用技术 质谱