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基于PCR方法对载体pBluescriptⅡSK(+)及pCAMBⅠA1300的定点突变.pdf
^
● C T
3·87
●卟ICULTUR^E华北农学报·2016，31(6)：8
B¨HLI-S啊I咖
IA1300的定点突变
及pCAMB
蒲 艳，刘 超，林 琪，李继洋，刘晓东
(新疆农业大学农学院，农业生物技术重点实验室，新疆乌鲁木齐830052)
II I A1300多克隆位点内相
摘要：运用PCR定点突变技术对载体pBluescriptSK(+)以及植物表达载体pCAMB
关的酶切位点进行改造，为运用CRISPR／Cas9基因编辑载体在构建敲除体系时提供更多便捷可用的酶切位点。通过
II I、EcoRV、SmaI、SacⅡ4个酶切位
酶切鉴定以及测序表明，成功将pBluescriptSK(+)载体多克隆位点内姗o
I I、SalI以2个
点，分别改造为Ⅳk I、MiI、PacI；将pCAMBA1300植物表达载体多克隆位点内的Sac
I、Mfe
酶切位点分别改造为NsiI、PacI，为今后构建CRISPR／Cas9基因组编辑载体及对植物功能基因进行精准定位研究
奠定一定的理论基础。
II I A1300；定点突变；PCR
关键词：pBluescriptSK(+)；pCAMB
中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：1000—7091(2016)06—0083—05
doi：10．7668／hbnxb．2016．06．013
Site-directed of lI
MutagenesispBluescriptSK(+)and
IA1300VectorsBasedonPCRMethod
pCAMB
PU
Yan，LIUChao，LIN
Qi，LIJiyang，LIUXiaodong
of of
(College AgricuhuralUniversity，KeyLaboratoryAgricuhural
Agronomy，Xinjiang
830052，China)
BiologicalTechnology，Urumqi
fortheconstructionof
orderto moreconvenientandefficientrestriction site
Abstract：Inprovide enzyme
CRISPR／Cas9 inthe clonesiteof II I
geneeditingsystem future，themultiple pBluescriptSK(+)andpCAMB
A1300vectorsweremodified．DNAshowedthatsite-directed were
sequences mutagenesissuccessfullyi
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