猪流行性腹泻病毒分离鉴定及其灭活疫苗免疫保护效果研究.pdf

动物医学进展 。2017，38(1)：5O一55 ProgressinVeterinaryMedicine 猪流行性腹泻病毒分离鉴定及其灭活疫苗 免疫保护效果研究 代洪波 ，岳丰雄 ，徐宏军，魏胜男，高 鹏 ，胡来根 (成都天邦生物制品有限公司，四川成都 610100) 摘 要 ：为筛选能用于猪流行性腹泻病毒 (PEDV)疫苗研发 的流行毒株 ，收集 PEDV 阳性病料 ，以Vero 细胞进行病毒分离试验 ，并对分离毒株进行外源病毒检测、病毒培养特性研究、仔猪毒力试验及免疫效力试 验等。9份 PEDV 阳性病料共分离到 3株病毒，分别命名为PEDV-SC12、PEDV—JS12、PEDV—JX12。其 中 PEDV—SC12株存在支原体污染；PEDV—JS12株与 PEDV—JX12株均能被 PEDV特异性 阳性血清 中和 ； PEDV—JS12株能在 Vero细胞上增殖并产生细胞病变，但适应细胞 45代 以后病毒培养效价仍然偏低； PEDV—JX12滴度能维持在 10。TCID。／mL以上。PEDV—JXl2株毒力试验显示，该分离株能够通过人工感 染复制 出腹泻病例 ，并能从发病动物体 内检测到感染的病毒。免疫攻毒保护试验显示，以PEDV—JX12株制 备的灭活疫苗免疫母猪 ，对所产仔猪攻毒后免疫组 6．25 (1／16)发病，对照组 100 (8／8)发病。说 明 PEDV—Jx12株能够适应细胞培养，免疫接种母猪能给仔猪提供有效保护，可以用于PEDV流行毒株的疫苗 研 发 。 关键词 ：猪流行性腹泻病毒 ；分离鉴定 ；毒力试验 ；免疫效力试验 中图分类号：$852．659．6；$858．28 文献标识码 ：A 文章编号：1007—5038(2017)01—0050—06 猪流行性 腹泻 (Porcineepidemicdiarrhea， 疫苗，可以给猪群提供一定的免疫保护。本试验利 PED)是 由猪流行性腹泻病毒 (Porcineepidemicdi— 用全国收集的多份 PEDV 阳性病料进行病原分离 arrheavirus，PEDV)引起的急性、高度传染性的肠 鉴定，并开展毒力与保护效力研究，旨在筛选能够用 道疾病 ，临床上主要 以严重呕吐、水样腹泻及脱水为 于PEDV疫苗研发的流行毒株。 特征 ，感染仔猪病死率极高 。1971年 ，猪病毒性腹 1 材料与方法 泻病毒首先在英 国被报道 ，主要引起架子猪和育肥 1．1 材料 猪急性腹泻，当时被称为 “流行性病毒性腹泻”。 1．1．1 主要试剂 PEDV胶体金检测试剂盒 ，安捷 1977年首次报道该病可侵害哺乳仔猪 ，症状与猪传 公司产品；病毒基因组 RNA提取试剂盒 、病毒基 因 染性 胃肠炎相似 ，在排除了猪传染性 胃肠炎病毒和 组 DNA 提取试剂盒、2×TaqPCR MasterMix、 其他病原 以后 ，将其命名为 2型腹泻 ，以与早期发现 DNAMarkerDL 2000等 ，天根生物 公司产 品； 的1型腹泻区别，随后分离得到该病的病原 ，命名为 DMEM 细胞培养液 、新生牛血清等，Gibco公司产 cV777l1]。1982年统一命名为 “猪流行性腹泻”。 品；O．22 m滤器 ，默克公司产品；Vero细胞、PEDV 之后该病在欧洲 、东亚 、东南亚 、北美洲等的许多国 特异性阳性血清(中和效价大于 1：16)由成都天邦 家均有报道L3]。 生物制品有限公司提供。 PEDV属冠状病毒 ，只有．1个血清 型，可以在 1．1．2 试验用动物 PEDV非免疫母猪所产 3日龄 Vero细胞上增殖 ，但小牛血清会抑制 PEDV与细胞 仔猪 12头 ，PEDV抗原抗体 阴性妊娠母猪 4头 ，筛 受体的结合。在培养液中添加一定量的胰酶，可 以 选 自成都周边养殖场 。 促进 PEDV在 Vero上产生 明显 的细胞病变 ]。 1．2 方法 2010年以来，中国暴发大规模猪腹泻疫情，证实