富硒蛹虫草筛选与`其耐硒特征探讨.docVIP

富硒蛹虫草的筛选及其耐硒特征的研究 　　摘 要：该文通过实验筛选出一株发酵周期短、菌丝体产量及富硒量较高的优质菌株北冬虫夏草1，研究冬虫夏草的耐硒特征。结果表明，在摇瓶培养过程中，北冬虫夏草的耐亚硒酸钠浓度为12μg/mL时，其生物量达到12.01g/L，富硒量达到4.635μg/mL，富硒率达到385.92μg/g。研究富硒北冬虫夏草的生长过程曲线，了解到当培养时间为72h左右时，其生物量最大且此时的富硒效果最好 关键词：北冬虫夏草；亚硒酸钠；硒含量测定；生长曲线 中图分类号 TS213.2 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2016）19-0037-02 Abstract：The selenium- enriched Cordyceps was screened， and the mutant Cordyceps 1 was obtianded. Fermentation conditions were investigated，the concentration of sodium selenite resistant 12μg/ml.Under the optimized conditions， the selenium content of the cells was up to 12.01g/L，Se amount was up to4.635μg/ml， selenium-riched rate was up to 385.92μg/g. The growth curve of cordyceps shows when the incubation time was about 72h， the biomass is the largest and the effect of selenium- enriched is the best. Key words：Cordyceps；Selenite；Determination of selenium content；Growth curve 北冬虫夏草（蛹虫草）生活史的有性阶段包括菌丝体生长和子实体生长[1]。鳞翅目、鞘翅目、双翅目等昆虫幼虫把蛹草拟青霉的孢子食入体内，还可以自由活动，即为“冬虫”，当条件适宜时，孢子便萌发形成菌丝体，菌丝体吸取虫蛹的营养作为其生长发育的物质和能源[2] 硒是人体必需的微量元素之一，研究发现，硒尤其是有机硒具有预防心脑血管疾病、抗肿瘤、提高免疫力、促进人体生长发育等作用，人体缺硒会导致多种疾病。据硒盐的毒理分析表明，无机硒均为剧毒，且不易被人体吸收，而有机硒化合物毒性远低于无机硒化合物，且生物利用率高[3]。通过人工方法将无机硒转化成有机硒，具有普遍的食用和保健价值。无机硒在虫草体内通过菌丝细胞内物质的代谢，结合到大分子活性物质（如多糖和蛋白质）上，转化为有机硒多糖和硒蛋白，从而发挥了硒和虫草固有的以及协同的生理作用，使其具有无毒、安全、高效的生理活性，进而为开发天然的富硒蛹虫草提供科学的理论依据[4] 1 材料与方法 1.1 菌种与试剂 1.1.1 菌种 供试蛹虫草（Cordyceps militaris）为本实验室保藏菌种，各菌株编号：蛹虫草1，蛹虫草2，蛹虫草3 1.1.2 试剂 土豆，黄豆，玉米粉（均购自同达森客超市）；葡萄糖，果糖，麦芽糖，蔗糖，磷酸二氢钾，硫酸镁，硝酸铵，氯化铵，硫酸铵（均为分析纯），蛋白胨，酵母粉，实验室已具有。酵子：玉米面活性干酵母 1.2 仪器与设备 KDM型控温电热套（山东鄄城华鲁仪器公司），生化培养箱（上海跃进医疗器有限公司，型号 SPX-250），手提式蒸汽灭菌器（江阴滨江设备有限公司），超净工作台（上海智诚分析仪器制造有限公司，型号 ZHJH-C1112B），恒温震荡培养器（上海智诚分析仪器制造有限公司，型号ZWY-100D） 1.3 蛹虫草富硒菌株的选育 取0.2～0.3cm的三种菌种的组织块分别接种到亚硒酸钠发酵培养基，装液量150mL/250mL，置于19℃、130r/min的恒温培养振荡器中震荡培养72h，测定其发酵液中残留无机硒（残硒）的含量及其生物量[5] 1.4 富硒蛹虫草发酵液的制备 将三角锥瓶中培养的液体移入离心管中，称重后等量对称放置在台式离心机中，以4 000r/min的转速常温离心30min，离心后的上清液即为发酵液[6] 1.5 蛹虫草生物量测定 采用干重法，将三角锥瓶中培养的液体移入离心管中，称重后等量对称放置在台式离心机中，以4 000r/min的转速常温离心30min，倾去上清液，将固体放到称量纸上，置于精密电热恒温鼓风干燥箱中，100℃烘干至恒重，称量[7] 1.6 硒标准曲线