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浅述酶底物法快速测定地表水中总大肠菌群与大肠埃希氏菌 摘要：根据《生活饮用水卫生标准》中对微生物指示菌检测的方法要求，提出采取精确、快速、可靠的总大肠菌群及大肠埃希氏菌检测方法，通过试验方法对比、实际水样检测，比较酶底物法与多管发酵法、滤膜法用于生活饮用水地表水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的检测结果。实验结果表明，酶底物法能够快速检测地表水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌，结果精确、快速、可靠，并认为在控制流行疾病的发生传播，从而保障公众健康安全有重要的预报价值和科学意义，同时鉴于我省大多数自来水公司的水质检测还没有增加此方法,建议今后该方法应得到普及和应用。 关键词：总大肠菌群；大肠埃希氏菌；酶底物法 我国新的国家《生活饮用水卫生标准》（GB 5749-2006） 1 实验部分 1.1总大肠菌群和大肠埃希氏菌快速检测法原理 酶底物法是指在选择性培养基上能产生 β-半乳糖苷酶（β-D- galactosidase）的细菌群组，该细菌群组能分解色原底物释放出色原体使培养基呈现颜色变化，同时能产生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase）分解荧光底物释放出荧光产物，使菌落能够在紫外光下产生特征性荧光，以此技术来检测水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的方法。 1.2 主要设备和试剂 （1）设备 100mL稀释瓶（能耐高压的灭菌玻璃瓶）；1mL、10 mL移液管或移液枪；生化培养箱 （36℃±1℃）；高压灭菌器；爱德士（IDEXX）） （3）根据表1的说明判断定性检测结果。 表1 定性判读结果 比阳性比色对照品的黄色浅 总大肠菌群、大肠埃希氏菌为阴 与阳性比色对照品的黄色相近或更深 总大肠菌群为阳性 与阳性比色对照品的黄色相近或更深且在紫外灯下显荧光 总大肠菌群、大肠埃希氏菌为阴性 1.3.3 定量分析 （1）用100 mL的无菌稀释瓶量取100 mL水样，加入MMO-MUG培养基粉末，混摇均匀使之完全溶解。见图1。 （2）将前述100mL水样全部倒入51孔无菌定量盘内，以手抚平定量盘背面以赶除孔穴内气泡。见图2. （3）用爱德士（IDEXX） 图1 图2 图3 图4 2 实验结果与分析 2.1 实验结果的判读 将水样培养24h后进行结果判读，如果结果为可疑阳性，可延长培养时间到28h进行结果判读，超过28h之后出现的颜色反应不作为阳性结果。 2.2 实际水样检测结果 本次实验分别采集三个不同地方的地表水进行同一方法（酶底物法）平行比对，不同方法（酶底物法和多管发酵法）比对实验，具体结果如下： （1）地表水水样平行检测结果（酶底物法） 选取三个不同地表水源水样采用酶底物法进行多次平行检测，具体检测结果见表2。 表2 地点 样品 阳性数 总大肠菌群 MPN/100mL 阳性数 大肠埃希氏 菌结果 MPN/100mL 100mL 50mL 100mL 50mL 地表水A 地表水A1 11 6 11 0 0 0 地表水A2 10 6 10 0 0 0 地表水A3 12 5 11 0 0 0 地表水A4 11 5 11 0 0 0 地表水A5 9 5 10 0 0 0 地表水B 地表水B 1 7 4 9 0 0 0 地表水B 2 9 5 10 0 0 0 地表水B 3 9 4 10 0 0 0 地表水B 4 9 4 10 0 0 0 地表水B 5 8 5 9 0 0 0 地表水C 地表水C 1 51 47 260 6 3 6 地表水C 2 51 49 330 9 5 10 地表水C 3 51 48 290 9 5 10 地表水C 4 50 45 220 6 3 6 地表水C 5 51 48 290 7 4 8 （2）同一水样不同检测方法比对（酶底物法和多管发酵法） 选取同一地表水源水样进行酶底物法和多管发酵法进行方法比对试验，具体试验结果如下图5、图6。 图5 图6 2.3结果分析和讨论 对酶底物法平行测定结果进行统计学分析， 对酶底物法和多管发酵法测定地表水样两组结果进行T检验，当置信度为95%时，对照t值表t= ,而t计值= ，，结果t计t，检验结果说明两种方法不存在显著性差异。 3 结语