六味地黄颗粒对哮喘大鼠促上皮生长因子与`其受体干预作用探讨.docVIP

六味地黄颗粒对哮喘大鼠促上皮生长因子及其受体干预作用的研究 　　【摘要】目的探讨六味地黄颗粒对哮喘大鼠气道重塑过程中促上皮生长因子（EGF）及促上皮生长因子受体（EGFR）可能的干预作用。方法用ELISA法检测哮喘大鼠肺泡灌洗液中的EGF及EGFR水平，比较空白对照组、哮喘模型对照组、各用药组之间两种蛋白水平的差异。结果哮喘模型对照组的肺泡灌洗液EGFR水平较其他各组明显增高（P0.05）；六味地黄颗粒治疗组的肺泡灌洗液中EGFR水平居于哮喘模型对照组和空白对照组之间。哮喘模型对照组EGF水平最高，明显高于其他各组（P0.05），但均显著低于其他三组（P0.05）.EGFR levels in bronchoalveolar lavage fluid of the Liuwei Dihuang granule group was between those of the asthma model control group and blank control group.Asthma model control group had the highest EGF level，significantly higher than those of other groups（P0.05），but they were all obviously lower than the three other groups（P 　　1材料与方法 1.1实验动物 将79只SPF级SD雄性大鼠随机分成五组。具体分组情况如下：布地奈德组（n=15）、六味地黄颗粒治疗组（n=17）、布地奈德吸入加六味地黄颗粒治疗组（n=16）、哮喘模型对照组（n=13）、空白对照组（n=18） 1.2实验药物及试剂六味地黄颗粒：遵钱乙《小儿药证直诀》中六味地黄丸的组方，即熟地黄、山萸肉、干山药、泽泻、牡丹皮、白茯苓，按8∶4∶4∶3∶3∶3比例制成免煎中药饮片颗粒剂（江阴天江药业有限公司生产），每包含生药10 g，温开水调制每毫升含生药1 g。布地奈德气雾剂（鲁南贝特制药有限公司），0.1 mg/瓶。卵清蛋白（OVA，恒因生物有限公司提供）：10 g/瓶。氢氧化铝（天津市博迪化工有限公司产品）。EGF、EGFR的ELISA试剂盒由武汉博士德生物工程有限公司提供 1.3方法 1.3.1造模第1、8天除空白对照组外，其余各组均以OVA辅以氢氧化铝凝胶为佐剂注射致敏，2周后雾化吸入2%OVA生理盐水混悬液激发哮喘，建立哮喘模型。从实验第8天开始，给药组布地奈德雾化吸入给药，六味地黄颗粒灌胃给药，其中布地奈德给药方法为每次激发前1 h预先吸入8 μg/kg布地奈德20 min，六味地黄颗粒给药方法为胃饲六味地黄丸颗粒20 gkg-1?d-1，空白对照组不予干预。造模时间共28天 1.3.2取材造模结束后24小时内腹主动脉取血，后开胸，结扎大鼠右支气管，气管插管，用生理盐水5 ml注入左侧肺组织内，反复抽吸，使得生理盐水回收率在85%以上。收集肺泡灌洗液，1500 r/min 5分钟，离心后取上清，-80℃保存待测 1.3.3造模成功的标志实验大鼠在雾化过程中出现不同程度的烦躁不安、呼吸增快、腹肌抽搐、大小便失禁等哮喘速发相反应。造模结束解剖实验大鼠，肉眼可见肺脏体积较空白对照组增大，肿胀，有形状不规则的暗红色充血区，病理切片HE染色可见支气管、肺泡腔内、肺间质和血管周围大量炎性细胞浸润，支气管黏膜下水肿，黏膜皱襞增多，肺泡隔增厚，气道平滑肌明显增厚 1.4指标检测肺泡灌洗液中EGF、EGFR的含量采用ELISA法检测，严格按照实际和说明书进行操作 1.5统计学方法实验结果在计算机上建立数据库，通过SPSS 17.0软件计算各组不同指标的平均值，所有计量资料经齐性检验后，采用单因素方差分析，检验水准：α=0.05 2结果2.1各组大鼠肺泡灌洗液中EGFR水平比较哮喘模型对照组的肺泡灌洗液EGFR水平高于其他各组，差异有统计学意义（P0.05）。六味地黄颗粒治疗组的EGFR水平居中，既显著低于哮喘模型组，又显著高于空白对照组，差异有统计学意义（P0.05），两组均显著低于其他各组（P