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- 2017-05-29 发布于湖北
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小鼠免疫程序
admin
一、抗原的准备1、收到抗原时,首先要了解抗原的种类、性质和浓度,以便采取不同的处理方法。2、多肽抗原,一般分多肽—偶联KLH和多肽—偶联BSA(或GGG)或裸多肽三种。多肽—偶联KLH一般用于免疫,而多肽—偶联BSA或裸肽一般用于检测,在免疫时注意区分使用。3、分装(1)收到抗原后,应及时按免疫需要分装,避免反复冻融。(2)如抗原是大肠杆菌重组蛋白,可能存在不溶性沉淀,分装前,应用超声粉碎仪粉碎,要注意,在冰浴中进行,超声强度应以溶液不产生泡沫的水平为准,超声强度过大,易产生泡沫导致蛋白变性,超声强度太低效果不佳,每次2-3秒,重复3-4次,超声完毕立即分装。(3)分装管应用不粘附蛋白的样品管,要用二种不同颜色的标签明确区分免疫用抗原和检测用抗原,并写明分装日期,抗原名,浓度和剂量。A 免疫用抗原:一般50ug/每只小鼠×5只=250ug/1个分装管,备做首次免疫用。另分装2个100ug/1管,备做融合前加强免疫用,再分装25ug/只/×5=125ug/1个分装管,共分装4-5管,备加强免疫用。B 检测用抗原:100ug/每管,分装共3管。C 分装好的抗原除马上免疫用管外,其余均装入小塑料袋中,写好抗原名标签,马上存入-700C。剩余抗原交保管员存-700C,并填好交接班表格。二、免疫程序1、多肽类抗原(包括MAP型多肽),第一次用
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