2016现代组织化学技术-免疫组织化学技术-硕研.pptx

现代组织化学技术 华中科技大学同济医学院 解剖学系组织胚胎学教研室 李宏莲 ;1. 什么是免疫组织化学技术？;ABC法显示胰岛B细胞;2. 免疫组织化学技术的基本原理;2. 免疫组织化学技术的基本原理;2. 免疫组织化学技术的基本原理;抗体经酶水解后的产物;抗体的种类;抗体的选择，稀释及保存;2. 免疫组织化学技术的基本原理;2. 免疫组织化学技术的基本原理;4. 免疫组织化学技术的分类;（2）根据标记物是否与特异性第一抗体结合 直接法：将特异性第一抗体用标记物标记，直接与标本中的相应抗原结合；特异性强、灵敏度差 *** 拟检抗原种类繁多，将标记物直接标记在其特异性抗体上成本高，商品化可能性低 间接法：对第二抗体进行标记，其中第一抗体可特异性结合组织或细胞中的待检抗原，第二抗体与第一抗体的Fc段结合 *** 优点：信息放大、提高反应的敏感性；只要有一种动物的标记第二抗体，便可用于该种动物的所有特异性第一抗体------间接法较直接法更为实用;（1）取材： 准确、迅速、大小合适、离体固定 （2）固定： 固定剂多选用醛类（4%多聚甲醛?0.01mol/LPBS常用，pH7.4）；固定方法根据情况选定，多用灌流固定法 （3）包埋及切片： 常用石蜡包埋切片和低温冷冻包埋切片，无论哪种切片方法，都要求薄而平整，尽量避免因折叠或划痕造成的非特异性着色 （4）粘片、烤片及防脱片处理： 也可做漂片，即漂在液体里面进行反应;6. 抗原修复;6. 抗原修复;7.免疫组织化学技术对照实验;（2）阴性对照： 阴性组织对照：用已知不含有靶抗原的标本与待检测标本同时染色的对照，结果应为阴性 阴性试剂对照：证实免疫组织化学所用试剂，尤其是第一抗体的特异性，是每一批免疫组织化学染色中不可缺少的对照实验 替换实验：用与第一抗体同种属的动物正常血清取代第一抗体 空白实验：稀释第一抗体的缓冲液如PBS代替第一抗体，必要时还可对第二抗体等做相应的替换或空白实验 吸收实验：先将第一抗体用过量的纯化抗原中和吸收，使其结合位点全部被加入的抗原结合封闭，不能再与标本内的靶抗原结合反应，再用这种吸收后的上清液替代第一抗体做免疫组织化学染色 抑制实验：将待测标本先用未标记的第一抗体反应，再用标记的第一抗体反应，该对照实验适用于直接法 自身对照：在同一标本上，特定结构或区域靶抗原的阳性反应与其他无关结构或区域的阴性结果之间的对照;二、免疫荧光组织化学技术; 荧光素 最大吸收光谱 最大发射光谱 荧光颜色 ;二、免疫荧光组织化学技术;二、免疫荧光组织化学技术;二、免疫荧光组织化学技术;FITC;三、免疫酶组织化学技术;三、免疫酶组织化学技术;三、免疫酶组织化学技术;三、免疫酶组织化学技术;三、免疫酶组织化学技术;三、免疫酶组织化学技术;三、免疫酶组织化学技术;三、免疫酶组织化学技术;四、亲和免疫组织化学技术;四、亲和免疫组织化学技术;四、亲和免疫组织化学技术;五、免疫金组织化学技术;五、免疫金组织化学技术;五、免疫金组织化学技术;五、免疫金组织化学技术;五、免疫金组织化学技术;六、双重或多重免疫组织化学染色技术;七、双重或多重免疫组织化学染色技术;七、双重或多重免疫组织化学染色技术;七、双重或多重免疫组织化学染色技术;七、双重或多重免疫组织化学染色技术;七、双重或多重免疫组织化学染色技术;七、双重或多重免疫组织化学染色技术;七、双重或多重免疫组织化学染色技术;七、双重或多重免疫组织化学染色技术;八、免疫组织化学结果评价;八、免疫组织化学结果评价;八、免疫组织化学结果评价;显色程序按照SP试剂盒说明书要求操作，呈色反应0.5h;针对上图结果思考以下问题： 1. 请描述以上SP法结果； 2. 请思考以上结果存在什么问题？可能原因是哪些？如何改进？