抗体在自组装单分子膜上的共价键固定化及其传感性能研究.pdfVIP

维普资讯 第 28卷第2期 辽宁师范大学学报 (自然科学版) Vo1．28 No．2 2005年 6月 JournalofLiaoningNormalUniversity (NaturalScienceEdition) Jun． 2005 文章编号：1000-1735(2005)02—0197—03 抗体在自组装单分子膜上的共价键固定化及其传感性能研究 冯春梁 ， 孙 越 ， 辛君华 (辽宁师范大学 化学化工学院，辽宁 大连 116029) 摘 要 ：．在单晶金片电极上制备了巯基十一酸-[SH(CH2)1oCOOH]自组装单分子膜，利用 1一乙基3-(3-二甲氨基)碳 二亚胺盐酸盐 (EDC)和 N一羟基琉代琥珀酰亚胺 (NHS)，将抗体 (纯化羊抗小 鼠IgG)以共价键形式 固定在金 电极上， 分别测定了裸金 电极、自组装单分子膜 电极、抗体膜 电极的电位响应，最后根据抗原 、抗体反应前后 电极 电位的变化， 对游离抗原进行检测，电极检测下限可达 0．5btg／L，检测范围为 0．5～12btg／L． 关键词：自组装单分子膜 ；免疫传感器；抗体 ；抗原 中圄分类号：O657．1 文献标识码 ：A 电化学免疫传感器是近年发展起来的生物传感器的一种 [1]，它利用抗原、抗体间的高度特异结 合 ，将传统的免疫测试方法与近代生物传感技术融为一体 ，具有选择性好、灵敏度高、检测速度快等优 点．电化学免疫传感器可分为电流型和电位型 2种 ，电位型免疫传感器又可分为直接 电位型和间接 电位 型．直接 电位型免疫传感器因其制备容易，抗原、抗体不需标记 ，所需设备简单等特点而备受关注．抗原 或抗体在 固相载体表面的固定化 ，是生物传感器及生物芯片制备的关键技术之一．功能蛋 白质分子在 固 相载体表面的固定化方法通常有包埋法、交联法、LB膜法 、分子 自组装等等．自组装单分子膜 (Self—As- sembledMonolayer，SAM)技术是近年来发展起来 的一种新 的成膜技术 ，为生物传感器及生物芯片的 研制提供 了 1种十分有利 的手段．所谓的 自组装单分子膜是分子在溶液 中 自发通过化学键牢 固地吸附 在 固相载体表面而形成 的 1种有机单分子膜 4【]，它具有均匀一致 、高密度堆积和低缺陷等特性 ，可以 按人们预期的 目标在分子水平上进行设计 ，是传统修饰 电极方法 的一大发展．一般认为有机硫化合物 (RS—SR或 R—SH)在金表面形成 自组膜是 由于金形成了 1价硫醇盐 [5]： RS—SR+Au：—．．RS—Au ·Au~一l R—SH+Au：—．．RS—Au Au~一l+I／2H2 将洁净的金电极浸入一定浓度 的巯基化合物溶液 中，化合物分子上 的一SH基 团 自发的与金结合形成 共价键．由于分子链间的范德华力、极化力等作用 ，通过侧压诱导效应 ，吸附平铺在金表面的巯基化合物 分子密度逐渐增大 ，同时平铺 的分子按一定角度重新排列，最终形成致密 的 自组装单分子膜 ．SAM 具有 牢 固、有序的优 良性能，只要选择末端为羧基或氨基 的巯基化合物制备成 SAM，再经活化 ，就能进一步 固定各种功能蛋 白质．利用 EDC和NHS的偶联作用可使抗体分子上的氨基与 自组膜上的羧基形成肽 键 ，从而使抗体分子 以共价键形式固定在金 电极上．固定化抗体与被检测溶液 中的游离抗原发生特异反 应 ，引起 电极 电位发生变化 ，从而达到检测抗原(如免疫球蛋 白、病毒、细菌)的 目的．高灵敏度免疫传感 器在临床检验 、环境监测、食 品安全 、军事医学等领域具有广 阔的应用前景．利用 自组装单分子膜技术制 备免疫传感器是当今生物传感器研究领域的前沿课题． 本文利用 自组装单分子膜技术研究了抗体的固定化方法．结果表明，自组装抗体膜 电极对相应抗原 响应灵敏 ，检测下限可达 0．5 g／L，检测范围为 0．5～12 g／L_ 1 实验部分 1．1 仪器与试剂 PXJ一1B型数字式离子计 (江苏电分析仪器厂)；78— 1型磁力加热搅拌器 (上海南汇 电讯器材厂)； 收稿 日期 ：2005-01—16