液相色谱法附录III D BP2010、2011.doc

附录　　　液相色谱法液相色谱法是基于液体流动相技术。流动相为通过嵌有固定相色谱柱进行渗透的液体。液相色谱法是基于质量分布、吸附机理，离子交换，分子筛或者立体化学的相互作用等机理来完成的。 仪器装备 装备系统由泵系统，进样器色谱柱（可能会柱温控制器）和数据（积分或图形记录），流动相通常是由一个或几个储液瓶提供，以恒定的流速经色谱柱后进入检测器。 泵系统 液相色谱的泵系统是以恒定的速率传送流动相的装置，压力脉动最小，例如加压溶剂脉冲抑制装置。管道连接系统能够抵挡来自泵系统的压力，液相色谱泵应配备一个渗出气泡的装置。 能够通过一个设置好的程序精确地传送（等度洗脱）或变化的（梯度洗脱）的流动相。梯度洗脱时，泵系统可以从几个储液瓶中传送溶剂，同时在泵的高压或低压都很好的混合溶剂。 进样器 样本溶液通过能够在高压操作的进样在色谱柱的顶端或接近顶端将液体注入流动的流动相中。进样器可为手动或自动的固定环或可变容积装置。手动可能会降低注射体积精度。 固定相 液相色谱中有许多不同类型的固定相，包括： ——二氧化硅，氧化铝或固体石墨，应用于基于吸附原理或质量分布原理来达到分离效果的正相。 ——具有酸碱集团的树脂或高分子聚合物，应用于离子交换色谱，是基于流动相中不同离子的竞争原理来进行分离的。 ——多孔或聚合物，应用于，是基于分子容量的不同（与立体排斥类似）的原理来进行分离的。 ——在高分子，硅胶或多孔石墨的基础上进行不同的化学分子修饰，应用于反相色谱，是基于流动相和固定相的不同微粒的原理进行分离的。 ——特殊化学修饰的固定相，如纤维素，直链淀粉衍生物，蛋白质或多肽类物质环糊精等，利用对映体进行分离（手性色谱）。 大多数分离是基于经过化学修饰的硅作为固定相，极性溶剂作为流动相的分离机制，载体的表面活性，例如，有硅醇聚合的二氧化硅，可以和各种硅烷试剂反应产生有许多活性部位的甲基硅烷衍生体的共价载体表面。键合相是决定色谱系统分离性能的一个重要的参数。 通用的键合相如下所示： 辛基 = Si-(CH2)7-CH3 C8 十八基 = Si-(CH2)17-CH3 C18 苯基 = Si-(CH2)n - (C6H5) C6H5 氰丙基 = Si-(CH2)3-CN CN 氨丙基 = Si-(CH2)3-NH2 NH2 二醇 = Si-(CH2)3-O-CH(OH)-CH2-OH 除非是生产厂商规定，硅基反相色谱柱在明显变化的PH2.0~8.0范围内的流动相中是稳定的含有多孔石墨或高分子材料微粒如苯乙烯二乙烯苯共聚物的色谱柱在一个很大PH范围内是稳定的。在某些情况下未修饰的二氧化硅，多孔石墨或者极性的经过化学修饰的如氰丙基或二醇修饰的硅非极性的流动相正相。 对于分析，固定相的为3μm~10μm颗粒可能是球形的或不规则的，具有多孔隙度或不同的比表面积。这些参数有助于一些特殊固定相的色谱分析。对于反相色谱，固定相键合的程度可用连接的碳的数量来表示是否在末端因素。当残余硅醇基时会出现峰的现象。 除非在论著中有特别的说明，色谱柱一般是不锈钢做成的，分析性色谱的色谱柱的长度和内直径是的，内直径小于2mm的色谱柱常称为微径柱，分析时流动相和色谱柱必须。在室温下，但是色谱柱会加热更高效率。固定相的性能会退化或改变流动相的组成发生变化色谱柱加热不超过60°C。 流动相 对于正相层析，极性溶剂，流动相，获得在反相液相色谱中，有机修饰的含水流动相。 流动相的组成部分通常会被过滤以去除大于0.45μm的粒子，多组分的流动相通各的体积（除非有具体的重量），混合或者溶剂通过配比阀泵来根据预期的比例混合液体溶剂在通过泵之前应先用氮气脱气，或利用在线膜真空模块防止探测内产生气泡。用于流动相制剂的溶剂，通常不会使用稳定剂，紫外光检测器的检测波长是透明的，溶剂和其它组分调节ＰＨ值，如果有必要的话，只用流动相中水性的组分而不用混合物，如果用缓冲液，利用水和经过有机修饰的流动相的混合物清洗系统，防止色谱盐类结晶。