无水体系中环氧氯丙烷活化琼脂糖凝胶制备高载量固定化金属亲和层析介质.pdfVIP

第 10卷第5 期 过 程 工 程 学 报 Vol.10 No.5 2010 年 1 0 月 The Chinese Journal of Process Engineering Oct. 2010 无水体系中环氧氯丙烷活化琼脂糖凝胶制备 高载量固定化金属亲和层析介质 张松平， 丁 锐， 苏志国， 王 平 ( 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室，北京 100190) 摘 要：在以二甲基亚砜为溶剂的无水体系中，利用环氧氯丙烷对琼脂糖凝胶 Sepharose 6 Fast Flow 进行活化，并偶 联亚氨基二乙酸和 Cu2+制备了固定化金属亲和层析介质. 结果表明，该体系中环氧氯丙烷对琼脂糖凝胶的活化效率大 幅度提高，在 40%(ϕ)环氧氯丙烷、0.02 g/mL NaOH 及 50 ℃、反应时间4 h 的优化条件下，环氧基活化密度最高达 165 μmol/mL ，较目前报道的最高值提高 50% 以上. 最终所制介质的 Cu2+螯合密度为 128.3 μmol/mL ，对BSA 的平衡吸附 容量达 2.05 mmol/L. 以0.5 mol/L 咪唑为洗脱剂，被吸附的 BSA 洗脱率可达 90% 以上. 关键词：固定化金属亲和层析；琼脂糖凝胶；环氧氯丙烷；活化 中图分类号：TQ425.6 文献标识码：A 文章编号：1009−606X(2010)05−0971−05 1 前 言 提高到了 100 μmol/mL 左右，但反应介质为水，水解反 随着生物技术的发展，固定化金属亲和层析 应仍较严重. 如果完全以 DMSO 替代水，在无水体系中 (Immobilized Metal Affinity Chromatography, IMAC)技 对琼脂糖进行活化，则有望进一步提高活化效率，进而 [1] [2] 获得高配基密度和对蛋白质具有高载量的 IMAC 介质. 术在蛋白质的分离纯化 、质粒DNA 提取 、蛋白质组 [3] [4] 本工作考察了环氧氯丙烷在 DMSO 中对琼脂糖凝 学研究 和蛋白质复性 等领域发挥着越来越重要的作 用. 载体活化和亲和配基偶联是制备 IMAC 介质的最关 胶 Sepharose 6FF 进行活化的反应条件，结果表明通过 键步骤. 利用环氧氯丙烷对琼脂糖凝胶进行活化后偶联 条件优化环氧基密度可达 163 μmol/mL. 以IDA 为螯合 上可与金属离子形成配位键的螯合剂，如亚氨基二乙酸 剂制备出了高金属离子密度的 Cu2+−Sepharose 6FF (Iminodiacetic Acid，IDA) 、次氨基三乙酸(Nitrilotriacetic IMAC 介质，该介质对蛋白质具有高的吸附容量. Acid ，NTA) ，是制备IMAC 介质的主要方法. 但目前商 2 材料与方法 业化 IMAC 介质的金属离子密度普遍较低，如 GE Healthcare 公 司 的 IMAC Sepharose 6 Fast Flow 2.1 材料和仪器 (Sepharose 6FF)是应用最广泛的金属亲和介质，Cu2+ 的 琼脂糖凝胶 Sepharose 6FF 购自瑞典 GE Healthcare 螯合密度仅为 32 μmol/mL ，从而导致对蛋白质的吸附容 公司，牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin, BSA)购自 量仅有约 25 mg/mL(与蛋白种类有关)[5]. 为制备出对蛋 美国 Sigma 公司，其他试剂包括二甲基亚砜(Dimethyl 白质具有更