亚香棒虫草菌丝体金属硫蛋白的提纯及性质.PDF

微生物学通报 Jun. 20, 2014, 41(6): 1035−1042 Microbiology China © 2014 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.130443 研究报告 亚香棒虫草菌丝体金属硫蛋白的提纯及性质 1 2* 1 2 2 张琪 程显好 郭文娟 刘凤红 王朝霞 (1. 300387) (2. 264025) 摘 要：【目的】探讨锌离子诱导亚香棒虫草(Cordyceps hawkesii)菌丝体金属硫蛋白的产生及性 2+在 10 L 发酵罐中诱导培养64 h 后收集菌丝体，产 质。【方法】亚香棒虫草菌丝体以18 g/L Zn 率为每升发酵液收集 12.2 g 菌丝体(干重) ，细胞破碎取上清液通过2 次凝胶柱层析，冷冻干燥 得到亚香棒虫草菌丝体金属硫蛋白纯品。利用考马斯亮蓝法(Bradford 法)进行含量测定，用银饱 和分析法结合原子吸收光谱(AAS)测定MT 含量，用Ellman’s 方法和火焰原子吸收法分别测得 巯基含量和结合锌原子数，用电喷雾质谱仪测得分子量，全自动氨基酸分析仪测氨基酸组成。 通过对羟基自由基、DPPH 自由基和超氧阴离子自由基的清除率试验探讨亚香棒虫草金属硫蛋 白的抗氧化活性。【结果】发酵终点金属硫蛋白产量为15.3 mg/g 菌丝体湿重。金属硫蛋白的分 子量为7 680 Da ，每分子蛋白质含有18 个巯基、结合4 个Zn 原子。氨基酸组成分析结果显示， 每分子蛋白质共含60 个氨基酸，其中含有 15 个半胱氨酸，且含有组氨酸和芳香族氨基酸。亚 香棒虫草金属硫蛋白的抗氧化活性稍强于谷胱甘肽，弱于动物金属硫蛋白。【结论】亚香棒虫 草在Zn2+胁迫下能够大量合成金属硫蛋白，且其金属硫蛋白的性质与哺乳动物金属硫蛋白有相 似性。 关键词：亚香棒虫草菌丝体，金属硫蛋白，锌诱导，氨基酸组成，抗氧化活性 Purification and characterization of metallothionein in Cordyceps hawkesii mycelia ZHANG Qi1 CHENG Xian-Hao2* GUO Wen-Juan 1 LIU Feng-Hong2 WANG Zhao-Xia2 (1. Tianjin Polytechnic University, Tianjin 300387, China) (2. Institute of Fungi Science and Technology Research , Ludong University , Yantai, Shandong 264025, China) Abstract: [Objective] To produce and characterize metallothionein in Cordyceps hawkesii mycelia under the zinc ion stress. [Methods] C. hawkesii achieved maximum mycelia of 12.2 g/L in a 2+ fermente