视神经脊髓炎患者血清胶质纤维酸性蛋白表达与临床意义.docVIP

视神经脊髓炎患者血清胶质纤维酸性蛋白的表达及临床意义 　　[摘要] 目的 通过检测视神经脊髓炎（neuromyelitis optic，NMO）患者与健康人的血清神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）水平，研究GFAP水平与NMO之间的关系。 方法 收集2013年6月～2015年4月的NMO患者27例和27例健康人的血清，采用酶联免疫吸附剂法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）检测样品吸光度，计算出GFAP的浓度。 结果 NMO患者组的血清GFAP浓度高于对照组，差异具有统计学意义（P0.05），具有可比性 1.2 NMO患者诊断标准 （1）年龄15～60岁；（2）均符合2007年Wingerchuk制定的NMO诊断标准[4，5]。必要条件：视神经炎与急性脊髓炎。支持条件：脊髓MRI表现异常，病灶累及超过3个椎体节段；头颅MRI不符合多发性硬化诊断标准；血清NMO-IgG阳性。如果必要条件全部符合，再加上支持条件中的2条，即可确诊为NMO。 　　1.3 排除标准 （1）曾患有脑卒中；（2）曾患有脑星形细胞瘤；（3）近期感染、组织损伤；（4）其他自身免疫性疾病 1.4 方法 1.4.1 样本采集 空腹采集肘部静脉血5 mL，存放于EDTA促凝试管中，之后置4℃冰箱2 h，等待血液凝固上下分层后，放到高速离心机中，3000 rpm，离心5 min，吸取上层血清，使用移液器将血清移到2 mL试管中，-20℃冰箱内储存备用 1.4.2 主要实验试剂和仪器 神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）酶联免疫试剂盒（CUSABIO BIOTECH公司）。常温离心机（Eppendorf公司，美国），微量移液器（Eppendorf公司，美国），METERTECM ∑960酶标仪（上海医疗器械七厂），BD-132冰箱（海尔公司，青岛），37℃细胞培养箱（Shel Lab，美国） 1.4.3 ELISA检测步骤 从冰箱取出GFAP抗体ELISA试剂盒，置室温30 min。准备标准品：在标准品中加入150 μL的稀释液，调整到20 ng/L浓度，然后倍比稀释，分别稀释为5个浓度：1200 ng/L、600 ng/L、300 ng/L、150 ng/L、75 ng/L。将标准品和血清样品各稀释5倍，每孔加40 μL的稀释液，然后加入10 μL样品，均匀振荡。用封板膜密封后，37℃孵育30 min。揭开封板膜，去掉液体，甩干，每孔加入洗涤液，放置30 s后弃掉，反复洗涤5次，干燥。每孔（空白孔除外）加入酶标试剂50 μL。再次进行之前步骤。每孔依次加入显色剂A、B各50 μL，摇匀后避光显色20 min。每孔加入终止液50 μL，终止反应。设置空白孔为0.450 nm波长依序测量各孔吸光度（OD值） 1.4.4 结果分析 制作标准曲线y=1352.3x-426.34，根据各个样品的OD值代入标准曲线方程，测得各个样品的浓度 1.5 统计学方法 实验数据通过SPSS19.0统计学软件进行统计分析，计量资料以（x±s）表示，组间比较采用t检验，检验水准α=0.05，P 　　[4] Wingerchuk DM，Lennon VA，Lucchinetti CF，et al. The spectrum of neuromyelitis optica[J]. Lancet Neurol，2007， 6：805-815. [5] Wingerchuk DM，Lennon VA，Pittock SJ，et al. Revised diagnostic criteria for neuromyelitis optica[J]. Neurology，2006，66：1485-1489. [6] Papadopoulos MC，Verkman AS. Aquaporin 4 and neuromyelitis optica[J]. Lancet Neurol，2012，11：535-544. [7] Saadoun S，Waters P，Leite MI，et al. Neuromyelitis optica IgG causes placental inflammation and fetal death[J]. J Immunol，2013，191（6）：2999-3005. [8] Misu T，Takano R，Fujihara K，et al. Marked increase in cerebrospinal fluid glial fibrillar acidic protein in neuromyelitis optica：An astrocytic