时间分辨荧光技术与荧光寿命测量.pdfVIP

第 23卷 　第 4 期 大 学 化 学 2008年 8月 今 日化学 时间分辨荧光技术与荧光寿命测量 李东旭 　许潇 　李娜 　李克安 (北京大学化学与分子工程学院　北京 100871) 　　摘要 　介绍了时间分辨荧光技术与荧光寿命的测量方法 、意义及应用 。 　　时间分辨荧光技术有基于时域和基于频域两种测量方法 。由于时间分辨结果数据包含有 比稳态荧光数据更多的信息 ,近年来 ,时间分辨荧光技术已成为生物化学与生物物理领域的主 要研究工具之一 。荧光寿命成像技术可以同时获得分子状态以及空间分布的信息 ,在生物学 和医学领域也得到了越来越广泛的应用 。以下将从原理 、仪器及应用等方面 ,简要介绍时间分 辨荧光以及荧光寿命测量技术 。 1　荧光及荧光寿命的基本原理 ( 　　分子吸光后去活化的原理与过程 ,可以直观的用 PerrinJ ab lon sky 图表示 图 1是一种简 ) 化表示 。简言之 ,分子中处于单线态基态电子能级 S0 的电子 ,依据 FrankCondon规则吸收一 ( ) 定波长的光子后 ,被激发至单线态激发态电子能级 一般是 S1 态 中的某一振动能级 ,这一过 - 15 ( - 12 - 10 ) 程约 10 s;在经历短暂的振动弛豫过程后 约 10 ～10 s ,会有大量电子在 S 1 态的最低 振动能态积累 。这一状态的电子会有几种释放能量 , 回到基态 S0 态的途径 ,包括振动弛豫在 内的这些途径被统称为去活化的过程 。若能量释放的过程中伴随着光子的放出 ,则称为辐射 去活 ;若只是通过碰撞等途径释放能量 ,而没有光子放出 ,则称为无辐射去活 。 图 1　Perr in Jablon sky简图 　　荧光发射即为一种常见的辐射去活过程 ,它通常是指电子发生 自 S1 态至 S0 态的跃迁 , 同 时放出光子的过程 ,这一过程的时间通常在 10 - 10 ～10 - 7 s。利用光学仪器检测荧光发射的强 度随时间的变化 ,即可得到体系的荧光寿命信息 。 1 　　无辐射去活过程有以下几种途径 : 内转换指的是电子在具有相同多重度的电子能态间发 生跃迁的过程 ,时间通常在 10 - 11至 10 - 9 s;系间跨越指的是电子在不同多重度的能态间发生 跃迁的过程 ,如单线态 S 1 至三线态 T1 的跃迁 ,其时间通常在 10 - 10 ～10 - 8 s;荧光猝灭指的是 激发分子通过分子间的相互作用和能量转换 ,从而释放能量的过程 ,也称作外转换 。这些无辐 射去活过程在决定体系的荧光寿命时起非常重要的作用 。 　　此外 , 电子跃迁至 T 态后 ,也有一定几率以放出光子的形式跃迁至 S 态 ,称作磷光发射 ; 1 0 或再次系间跨越回 S1 态 ,并放出一个光子回到 S0 态 ,称作延迟荧光 。限于篇幅 ,这两类发光 情况不在此作讨论 。 2　荧光衰减曲线及荧光寿命 [ 1～3] 　　在激发光源的照射下 ,一个荧光体系即向各个方向发出荧光 ; 当光源停止照射时 ,荧光不 会立即消失 ,而是会逐渐衰减至 0。基于以上原理 ,可以对一个理想体系的荧光衰减进行严格 的数学推导 。 　　对于荧光物质 A 的稀溶液 ,