蔡锡渠—宫颈癌筛查技术--HPV12+2检测.pptxVIP

; ;3;HPV分型检测的意义（1）预测受检者发病的风险度，确定最佳的治疗时期;基线筛查细胞学阴性/高危HPV阳性的女性10年内≥CIN3病变的累积发病率;对204例宫颈癌患者前瞻性研究发现，HPV18型感染者是预后不良的重要指标，HPV18阳性5年存活率54.1%，而其他高危型感染的存活率为83.8%。HPV18型阳性者复发率53.6%，而HPV16型复发率仅为15.9% 51例宫颈癌手术患者中，9例发生淋巴转移中有6例为HPV18型 107例晚期宫颈癌患者放疗治疗组中，HPV18型阳性者5年存活率为15.5%，而HPV16型为73.1%; ;（3）针对不同型别的感染采取不同的处理方案; ;荧光PCR原理;HPV系列产品;14种高危型人乳头状瘤病毒联合16/18基因分型检测（12+2）试剂盒;;;; 我们一般把荧光PCR的前15个循环信号作为荧光本底信号（baseline，基线期） ，即样本的荧光背景值和阴性对照的荧光值，扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖。;1 定性结果判读 1）阴性对照Ct值均应显示为Undet。 阳性对照Ct值≤36。 符合以上两个条件，此反应是为有效。 2）样品的Ct值显示为Undet，判断为阴性。 3）样品的Ct值≤40，判断为阳性； 4）若为40＜Ct值＜45的样本建议重做，重做结果Ct值＜40者为阳性，否则为阴性。 5）如果出现Ct值＜15的强阳性样本，可直接报告为阳性或自动分析，并将其从样品表中剔除，再按上面步骤分析其他样本，或建议进行1/100稀释重做。;1 扩增曲线出现交叉 扩增曲线出现交叉，主要是因为多引物、多探针反应体系中，每种型别的扩增效率不一样所致。同时，样本本身的原因也可能造成荧光曲线的差异。;3 个别荧光曲线突然(较大)下降 反应管内留有气泡，由于温度升高后可能会造成气泡破裂，使荧光值突变降低，加入模板DNA后混匀离心，把反应管放置仪器内时要检查管内是否有气泡。 4 阴性对照产生较高荧光 反应MIX被污染；反应管不干净，有杂物；反应过程中探针降解。 5 标准曲线的线性关系不佳 加样存在误差，使得标准品不呈梯度； 标准品出现降解，应避免标准品反复冻融，或重新制备并稀释标准品。 ;6 阈值设置不同，是否会导致阴阳性结果判断的不统一？ 结果的判读不能只依赖于Ct值的大小，还要看是否出现明显的扩增曲线。二者结合才能判断试验结果。 阈值设置的高低会使Ct值有一定的变化，但变化一般都比较小。只有很少的样本会出现在Ct=40左右波动。这样的样本如扩增曲线明显可以判读为阳性，如扩增曲线不明显或荧光增长值不高则建议重做。; 7 检测方法中“定性”和“定量”的问题 目前，尚没有任何一种检测方法可以达到“定量”检测HPV病毒的目的。这是由于采样方法本身的局限性所造成的： 在采集宫颈脱落细胞的过程中，虽然反复强调要采集“HPV易感区——转化带”的脱落细胞，但由于不同操作人员对“易感区”部位的判断以及取样手法的不同，我们不能准确评估出取得的细胞样品中携带病毒分子的细胞数量。 比如：在第一次采集细胞样品时，取得了500个携带病毒分子的细胞，经过检测后，我们得出患者携带病毒数量是500；而对同一位患者进行第二次采集细胞时，由于多刷了一圈或者恰恰取到了“病灶区”，所以取得了1000个携带病毒分子的细胞，经过检测，又得出携带病毒数量是1000。因为采样操作本身的问题，使得前后这两个数字已经失去了它所具有的含义，因此，再将这两个数字放在一起比较也就不具有任何实际意义。而且，因为病毒载量与病变程度之间的关系尚没有完全阐明，所以HPV病毒的定量检测对临床治疗没有任何指导意义。 如果一定要使用“定量”这个词语，那也只能在前面再加上“相对”二字。因为，这个“定量”仅仅是将采集到的细胞样品中的病毒数量进行了“定量”，而不是对患者本身所携带的病毒数量进行“定量”。 ;创新专业追求卓越