甜柿黑腐病病原菌鉴定.doc

甜柿黑腐病的病原菌鉴定 　　摘 要：2012 年，云南省保山市隆阳区蒲缥镇甜柿种植区出现个别单株发病，零星死亡的现象，随后该病害就从中心病株扩展到附近单株，发展形成发病中心；发病田块30%的甜柿植株受害，造成果农重大经济损失，随后几年期间，该病害呈继续上升趋势，为此对病害进行了诊断，对病原菌进行了分离、鉴定以及致病性测定。结果表明：引起甜柿植株腐烂死亡的现象是由柿拟盘多毛孢Pestalotiopsis diospyri（ Syd.）Sun et Ge所引起的一种侵染性病害，该病害为国内首次报道 关键词：甜柿；黑腐病； 柿拟盘多毛孢 中图分类号：S436.65 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20161033012 柿子（Diospyros Kaki L.f）为柿树科 （Ebenaceae）柿树属 （Diospyros）多年生落叶大乔木植物，又名朱果，猴枣，原产东亚，我国有3000多年的栽培历史[1]。柿子不仅营养丰富，含有大量的糖类及多种维生素，而且具有很高的药用价值和经济价值。甜柿，作为柿子的一个品种，广泛引种栽培于滇中-川南地域及汉江中上游区域，尤以云南省保山市，湖北省恩施州较为出名。危害柿树的生长的病虫害有：草履蚧、龟蜡蚧、长绵蚧、日本双棘长?C、柿炭疽病、柿圆斑病、柿子角斑病等[2] 。自从2012年以来，在云南省保山市隆阳区蒲缥镇甜柿种植区，个别甜柿单株发病，出现零星死亡的现象；随后该病害就从中心病株扩展到附近单株，发展形成发病中心；果园30%的甜柿植株受害，在甜柿嫁接口附近产生黑色的病疤，造成大量的落果现象，多数果农已经开始连根挖除田间死亡的病树；2012年隆阳区农业局、果蔬站组织对蒲缥镇以外的其它甜柿种植区进行调查，发病面积有逐渐上升的趋势，严重的柿园已全部发病，达到全园毁灭的程度，造成重大经济损失，该病已成为一种毁灭性病害 为此对病害的发生情况进行了调查，对病原菌进行了分离鉴定，为病害的防治提供理论依据 1 材料与方法 1.1 病原菌分离 1.1.1 样品采集 病株样品从云南省保山市隆阳区蒲缥镇甜柿种植区采集，并在实验室进行分离培养实验及病原菌鉴定。该镇地理位置为E9843～9926，N2446～2538′，海拔3655.9m，年均气温14.9～17℃，土壤pH为在6.0～7.0之间，呈微酸性，肥力中等 1.1.2 分离培养方法 将病株洗净，在嫁接口位置的病健交界处剪取6mm×6mm组织。用灭菌水清洗表面3～5次，然后依次在75%酒精和0.1%升汞中进行表面消毒，后用灭菌水清洗组织，随后移入PDA培养基平板上。培养皿放入25℃的恒温培养箱内培养，菌落形成后，挑取边缘纯化菌丝转接PDA斜面保存 1.2 形态学鉴定 观察培养分离物的生长情况，描述其菌落形态。在显微镜下镜检菌丝、分生孢子器和产孢细胞以及分生孢子的形态特征，测量其大小等，参照有关资料进行鉴定 1.3 致病性测定 选择健康的甜柿嫁接苗，将分离纯化培养好的菌落配成孢子悬浮液（浓度为1×106个孢子/mL）进行接种。接种方法为微伤口涂抹法及无伤口涂抹法，将接种后的植株放入25℃，相对湿度95%的光照培养箱中，定期观察发病情况。用相同的健康甜柿嫁接苗喷灭菌水作为对照 2 结果与分析 2.1 病害症状 该病危害植株主杆基部，发病部位嫁接口附近产生较多黑色浸渍状斑点，随着时间的推移，嫁接口黑色斑点不断扩大并连结成片，形成黑色病疤（图1-a），植株提前落果并成遍死亡。环境湿度大时病斑表面出现白色霉层，霉层中伴有黑色颗粒 2.2 病原菌形态 病原菌菌落为白色，放射状生长，后期菌落上产生小黑点即为病原菌的分生孢子盘（图1-b）。寄住上的病菌分生孢子盘（图1-d）埋生在甜柿树表皮下，成熟后突破表皮外露，黑褐色，直径112～238μm；分生孢子梗短，不分枝；分生孢子纺锤形或近梭形，有4个隔膜，分隔处稍缢缩，中间3个细胞榄褐色，大小21.6～30.6m×7.2～10m，顶端具纤毛3～4根，无色（图1-c）。病原菌鉴定为柿拟盘多毛孢Pestalotiopsis diospyri（ Syd.）Sun et Ge ，其分类地位属半知菌亚门（Deuteromycotina）-黑盘孢目（Melanconiales）-黑盘孢科（Melanconiaceae）-拟盘多毛孢属（Pestalotiopsis） [3] 2.3 致病性测定结果 接种第14天，在伤口涂抹法接种的植株嫁接口附近开始出现若干黑色病斑，21d后发现其症状与田间发病植株相同，取病组织分离培养，镜检病原菌，发现其分生孢子盘和分生孢子的形态特征和果园病株上的病原菌一致，说明柿拟盘多毛孢就是造成甜柿黑